高危型HPV感染、DNMT1表达和DAPK基因启动子甲基化状态在宫颈病变中相关性的研究

摘要

目的：
　　 1.检测宫颈病变细胞中DNMT1蛋白表达状态和抑癌基因DAPK启动子区的甲基化状态，探讨其在宫颈病变发生发展中的作用；
　　 2.探讨高危型HPV的感染、DNMT1表达和DAPK启动子区甲基化状态间的相互关系，可进一步了解宫颈病变的发生机制，对该病早期筛查及病情发展的监测提供帮助。
　　 方法：
　　 1.研究对象随机选择2011年1月至2011年12月我院妇科门诊患者中均行TCT和阴道镜检查的150例患者，根据阴道镜宫颈活检的病理诊断结果，分为子宫颈上皮内瘤变I级(CINI)30例，子宫颈上皮内瘤变II级(CINII)30例，子宫颈上皮内瘤变III级(CIN111)30例，鳞状细胞癌(SCC)30例作为研究组；另取未见恶性细胞和上皮内病变细胞(NILM)30例为对照组。
　　 2.检测高危型HPV-DNA感染情况取患者的TCT剩余标本，提取DNA，SPR方法检测高危型HPV，运用生物传感芯片阅读仪读取高危型HPV-DNA感染情况。
　　 3.检测DNMT1蛋白表达状态取上述所选患者的TCT剩余标本（保存期不超过3周），经Thinprep2000系统重新制片1张，置于95％酒精中室温固定24小时，空气中晾干，置冰箱4℃储存备用拟行DNMT1蛋白的免疫细胞化学检测。显微镜下观察细胞图片，细胞质及细胞间质出现棕褐色颗粒者为阳性。
　　 4.检测抑癌基因DAPK启动子区的甲基化状态取入组患者的TCT剩余标本，采用MSP技术，检测患者宫颈脱落细胞DAPK基因启动子区的甲基化状况。摄像观察8％PAGE上电泳结果：获得甲基化产物，无论是否出现非甲基化产物，均判定为甲基化阳性；只出现非甲基化产物判定为甲基化阴性；甲基化产物与非甲基化产物均未获得判定该标本实验失败。
　　 5.统计学分析采用SPSS18.0软件包进行统计分析，检验水准a=0.05。
　　 结果：
　　 1.150例宫颈各病变阶段宫颈脱落细胞中高危型HPV-DNA的检测情况：高危型HPV感染阳性率为80.67％(121/150)，随着病变程度的进展，各组间高危型HPV感染率存在统计学差异（X2=30.658，Ph0.05），且呈现出增高的趋势（趋势X2=30.658，P＜0.05）。
　　 2.宫颈病变各阶段DNMTI蛋白检测结果：NILM组6.67％;CINI组56.67％;C!NII组63.33％;ciNⅢ组66.67％;SCC组76.67％。DNMTI蛋白在各宫颈病变阶段组中的阳性表达率差异有显著性(P＜0.05)，且随着病变程度的进展，DNMT1蛋白表达率呈现出增高的趋势(P＜0.05)。
　　 3.本实验中随着病变程度的进展，DAPK基因启动子区CpG岛的甲基化率分别为3.33％、lO.OO％、13.33％、46.67％、60.00％，各组间有显著性差异(P＜0.05)，且呈现出增高的趋势(P＜0.05)。
　　 4.在宫颈病变的过程中，高危型HPV感染、DNMTI蛋白表达与DAPK基因甲基化两两间相关系数分别为0.340、0.214、0.444，互呈正相关（P均＜0.05）。
　　 结论：
　　 随着宫颈病变级别的升高，高危型HPV持续性感染、DNMT1蛋白异常高表达、DAPK抑癌基因的异常高甲基化，各指标间可能存在相互间的促进关系，可以为宫颈病变的发现和病变程度的监测提供新思路、新方法。

目录

声明

摘要

英文缩写词表

前言

第一部分 宫颈各个病变阶段脱落细胞中高危型 HPV-DNA 的检测

第二部分:宫颈各个病变阶段脱落细胞中 DNMT1 表达情况的检测

第三部分:宫颈各个病变阶段脱落细胞中 DAPK 甲基化状态的检测

讨论

结论

参考文献

附图

综述

附录

个人简介