甲基化对E-钙粘素、Snail基因的双重抑制作用

摘要

研究目的：探讨肿瘤抑制基因反义Snail与去甲基化药物5-氮杂-2'脱氧胞苷协同对胃癌低分化细胞株BGC-823的作用，探讨其对上皮间质转化相关膜蛋白E-钙粘素的mRNA水平的影响及二者联合作用的可能机制。方法：应用MTT、流式细胞术、PCR、实时荧光定量PCR、检测胃癌细胞株BGC-823分别转染反义Snail、应用5-氮杂-2'脱氧胞苷单独或协同干预后对细胞的增殖抑制、凋亡率及E-钙粘素、Snail基因表达的影响。所有数据采用SX±，经SPSS软件分析，P＜0.05差异具有统计学意义。结果：与空白对照组比较2.5uM、5.0uM5-氮杂-2'脱氧胞苷干预均使E-cadherin的mRNA重新高表达，不同浓度药物组间两两比较，0.1A分别与2.5A、5.0A比较差异显著（P＜0.05），2.5A与5.0A之间比较无明显差异（P＞0.05），三个时间（12h、24h、48h）两两比较，差异均具显著性，5-Aza对E-cad基因表达影响具有浓度-时间依赖性，2.5uM48h时作用最显著。5-Aza处理对Snail基因也呈表达上调，且在2.5uM48h时作用最显著。药物对E-cad的作用在转染反义Snail质粒后仍呈上调表达，转染反义质粒后E-cad显著上调，Snail基因显著下调（P＜0.05）。结论：5-氮杂-2'-脱氧胞苷能使低分化胃腺癌细胞株内E-cadherin重新高表达，且作用呈浓度-时间依赖性，2.5A作用48hE-cadherinmRNA表达显著上调。5-Aza同时使Snail基因表达增高，作用具有浓度-时间依赖性。提示启动子甲基化对转录调节因子Snail基因mRNA的表达和E-钙粘素的表达的发挥双重抑制作用；转染反义Snail前后，E-cad基因表达上调而Snail基因表达下调。提示：胃癌细胞中发展中，甲基化起关键作用，且甲基化对转录调节的作用方向与基因的自身甲基化水平有关。转染反义Snail、5-Aza都有抑制低分化胃腺癌细胞生长的作用，促进肿瘤细胞凋亡作用，且抑制作用与药物呈时间浓度依赖性。

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