白桦脂酸对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡、迁移的影响及其抗肿瘤侵袭转移机制探讨

摘要

目的：
　　观察白桦脂酸在体外水平上对人结肠癌HT-29细胞增殖、凋亡、迁移的影响，同时探讨白桦脂酸抗肿瘤侵袭转移的机制。
　　方法：
　　体外培养人结肠癌HT-29细胞，并配制不同浓度的药物(白桦脂酸浓度分别为0ug／L（空白对照组）、5ug／L、10ug／L、20ug／L、40ug／L)，分别作用于细胞。用倒置显微镜观察药物作用于后细胞的生长情况。用MTT法评估药物对细胞增殖的影响；用流式细胞术分析药物对细胞凋亡程度的影响；用细胞划痕实验检测药物对细胞迁移能力的影响；用实时荧光PCR技术定量分析药物对细胞内乙酰肝素酶mRNA表达的影响。
　　结果：
　　1.显微镜下观察对比细胞形态：空白对照组细胞体积大、呈圆形，胞质丰富，呈紧密贴壁生长。药物组细胞体积减小，细胞皱缩，数目较少，边界不清，贴壁不紧密，呈缓慢生长状态，可见坏死漂浮细胞。
　　2..MTT法检测细胞增殖抑制率：不同浓度的药物（5ug／L、10ug／L、20ug／L、40ug／L）分别作用于细胞，作用24小时后，药物组相对于空白对照组（0ug／L）的抑制率分别为13.5％、26.1%、45.8%、51.3%。作用48小时后，抑制率分别为14.4%、30.0%、51.1%、62.4%。作用72小时后，抑制率分别为19.0%、35.0%、53.8%、65.0%。其组间差异有统计学意义（P<0.05），即表明白桦脂酸在体外水平可以抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖，而且这种抑制作用随着药物浓度的增加、作用时间的延长而增加。
　　3.流式细胞术检测细胞凋亡率：不同浓度的药物（5ug／L、10ug／L、20ug／L、40ug／L）分别作用于细胞48小时，各组的凋亡率分别为3.4%、9.2%、20.4%、27.4%，空白对照组（0ug／L）的凋亡率为2.0%。说明白桦脂酸在体外水平可以促进细胞的凋亡，而且凋亡率随着药物剂量浓度的增加而增加，各组之间相比差异显著，有统计学意义（P<0.05）。
　　4.细胞划痕检测细胞迁移抑制率：药物作用于细胞48小时后，对照组细胞迁移距离（um）为152.17±3.51。药物组迁移距离分别为144.21±1.75、127.14±2.26、101.52±0.50、73.32±1.26。结果显示，药物可以使细胞的迁移能力降低，而且迁移能力的降低程度并随药物浓度的增加而增加，各组之间相比差异显著，有统计学意义（P<0.05）。
　　5.实时荧光定量PCR检测细胞中乙酰肝素酶mRNA表达：在不同药物浓度的干预下（0ug／L、5ug／L、10ug／L、20ug／L、40ug／L），细胞中乙酰肝素酶mRNA表达量分别为1.000±0.034、0.910±0.034、0.856±0.156、0．694±0.006、0．474±0.073。说明药物可抑制细胞中乙酰肝素酶mRNA的表达，抑制效果随着浓度的增加而增加。各组之间相比差异显著，有统计学意义（P<0.05）。
　　结论：
　　1．白桦脂酸可以在体外水平有效的抑制人结肠癌HT-29细胞的增殖，并呈时间和剂量依赖性。
　　2．白桦脂酸可以在体外水平诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡，并呈剂量依赖性。
　　3．白桦脂酸可以在体外水平有效的抑制人结肠癌HT-29细胞的迁移，并呈剂量依赖性。
　　4．白桦脂酸可通过抑制人结肠癌HT-29细胞内乙酰肝素酶的表达，从而抑制肿瘤细胞的侵袭和转移。

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前言

材 料 与 方 法

1、 实验材料

2 实验方法：

3 统计学分析

实验结果

1. 白桦脂酸作用先后人结肠癌HT-29细胞形态学改变：

2. 白桦脂酸对人结肠癌HT-29细胞增殖能力的影响

3.白桦脂酸对人结肠癌HT-29细胞凋亡的影响：

4、白桦脂酸对人结肠癌HT-29细胞迁移能力的影响：

5、白桦脂酸对人结肠癌HT-29细胞内乙酰肝素酶mRNA表达的影响：

讨论

结论

参考文献

综述:乙酰肝素酶在肿瘤侵袭转移中的表达及其相关调控

致谢

在学期间承担/参与的科研课题与研究成果

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