类风湿关节炎滑膜成纤维细胞粘着斑激酶与p53对细胞增殖的研究

摘要

背景：
　　类风湿关节炎（RA）以慢性和侵蚀性滑膜炎为主要特点的一种自身免疫病，可影响多个关节导致其破坏、变形，并最终造成身体残疾，给患者带来极大的痛苦。RA患病率为0.5％～1%，大量研究表明成纤维样滑膜细胞（FLS）的异常增生是RA发病的关键。粘着斑激酶（FAK）是一种蛋白激酶，参与细胞内的信号转导。在肿瘤研究领域，FAK能通过其N-末端的FERM结构域与p53结合,进而抑制细胞凋亡，即FAK可通过抑制p53基因的表达来阻止肿瘤细胞凋亡从而导致肿瘤的发生。研究发现RA患者FLS与肿瘤细胞有许多相似的特性，如进行性增生、迁移和侵袭，其机制可能同肿瘤细胞无限增殖及转移的机制相似。我科前期研究表明，FAK在RA滑膜组织中表达量较正常滑膜组织显著升高，且通过抗风湿治疗后，可抑制FAK表达，促进FLS凋亡，这表明FAK在FLS的过度增生过程中起重要作用。还有研究表明，p53缺失可能参与RA滑膜组织增生这一病理过程。那么在RA的发病过程中，FAK是否可与p53相互作用，使p53表达减少导致FLS过度增殖，从而参与RA的发病机制，值得研究。
　　目的：
　　1、通过体外研究FAK、p53在RA成纤维滑膜细胞中的表达，探讨RA的发病机制；
　　2、探讨FAK、p53对RA成纤维滑膜细胞增殖的影响，为治疗RA提供新靶点。方法：
　　1、取确诊的RA患者滑膜组织进行体外培养；
　　2、对体外培养的RA患者滑膜细胞进行不同处理，分别加入TNF-α（10ng/ml）及不同浓度的蛋白酶抑制剂（MG-132）（1μM、5μM、10μM、20μM），48h后RT-PCR检测各组FLS上FAK及p53 mRNA的水平；
　　3、体外培养的滑膜细胞分别加入不同浓度的蛋白酶抑制剂（MG-132）（1μM、5μM、10μM、20μM），分别于处理后的24h、48h、72h、96h进行细胞增殖试验；
　　4、采用SPSS17.0统计软件分析。
　　结果：
　　1、TNF-α作用后滑膜细胞的FAK mRNA水平较对照组增高，差异有统计学意义（P＜0.05）；TNF-α作用后p53 mRNA水平与对照组比较有所降低，差异无统计学意义（P＞0.05）；
　　2、MG-132作用后滑膜细胞的p53 mRNA水平较对照组增高，差异有统计学意义（P＜0.05），以浓度为5μM时p53 mRNA水平最高；MG-132作用后FAK mRNA水平较对照组有所降低，差异无统计学意义（P＞0.05）；
　　3、不同浓度的MG-132作用后，FLS的增殖情况与对照组比较受到抑制，差异有统计学意义（P＜0.05）。
　　结论：
　　1、粘着斑激酶在体外经TNF-α作用后其mRNA水平增高，经MG-132作用后其mRNA水平略有降低，粘着斑激酶参与类风湿关节炎发病过程；
　　2、p53在体外经MG-132作用后其mRNA水平增高，p53可抑制类风湿关节炎成纤维滑膜细胞的过度增殖，在类风湿关节炎发病机制中有重要作用。