日本刺参胶原蛋白多肽和鱿鱼皮胶原蛋白多肽护肤活性的研究

摘要

已证明，海参体壁及鱿鱼皮中的胶原蛋白含量很高，其水解产物具有特殊的生理活性，主要体现在免疫活性、抗高血压、调节血脂、抗氧化、促生长、抑制肿瘤活性等方面，在医疗、保健及美容领域具有良好的应用前景。本文利用商业蛋白酶对海参体壁及鱿鱼皮胶原蛋白进行酶解，并结合膜分离技术制备不同分子量的活性多肽，探讨日本刺参胶原蛋白多肽(AJCP)和鱿鱼皮胶原蛋白多肽(SSCP)对紫外线诱导的皮肤光老化模型小鼠皮肤的保护作用，以及对小鼠B16黑色素瘤细胞黑素合成的影响及作用机制。主要研究结果如下： 采用日本刺参匀浆灌胃移植性肿瘤模型小鼠，探讨了日本刺参的抗肿瘤作用及其对免疫功能的调节作用。结果表明，不同剂量组的日本刺参均能显著抑制小鼠S<,180>肉瘤的生长，提高小鼠脾指数及胸腺指数(P<0.05)；显著提高荷瘤小鼠血清溶血素含量(P(0.01)和抗体形成细胞数(P<0.05)；提高迟发型变态反应和脾淋巴细胞转化能力(P<0.05，P<0.01)；促进NK细胞活性和巨噬细胞的吞噬能力(P<0.05，P<0.01)。提示日本刺参能全面调节机体的特异性和非特异性免疫功能，控制和杀灭肿瘤细胞。 采用AJCP和SSCP连续灌胃紫外线诱导的光老化模型小鼠，探讨了AJCP和SSCP对紫外线照诱导光老化模型小鼠皮肤的防护作用。结果表明，AJCP和SSCP可有效地改善光老化小鼠皮肤胶原纤维的受损程度，并能显著清除羟自由基和超氧阴离子，提高小鼠SOD、GSH-Px、CAT活性，降低MDA含量(P(0.05，P<0.01)。同时，能显著提高皮肤总Hyp含量。皮肤组织的形态学观察结果进一步表明，AJCP和SSCP均能有效地改善小鼠皮肤胶原纤维的受损程度，对受损的胶原纤维表现出一定的保护作用。提示AJCP和SSCP均对紫外线诱导光老化模型小鼠的皮肤具有防护作用。 采用细胞及分子生物学技术，探讨了AJCP和SSCP对小鼠B16黑色素瘤细胞黑素合成的影响及作用机制。结果表明，不同分子量的AJCP和SSCP均能显著降低B16黑素瘤细胞黑素含量(P<0.05，P<0.01)，抑制酪氨酸酶活性(P<0.01)，并下调酪氨酸酶mRNA表达(P<0.05，P<0.01)，增加细胞内GSH含量，降低GSSG和cAMP含量(P<0.05，P<0.01)，且剂量效应关系明显。提示不同分子量AJCP和SSCP均具有显著抑制B16黑素瘤细胞黑素合成的作用，其作用机理可能与清除活性氧自由基，抑制酪氨酸酶活性，同时降低cAMP含量而减少cAMP-依赖的黑素合成有关。本文首次全面系统的研究了海参及鱿鱼皮胶原蛋白多肽的一系列生理活性，丰富了胶原蛋白研究领域，填补了国内空白。深入开展海参体壁胶原蛋白多肽生物活性的研究，为海参生物活性物质的研究做有益补充，为其综合利用提供科学依据；同时通过对鱿鱼皮胶原蛋白多肽生物活性的研究，为水产品加工废弃物的高值化利用开辟一个新的渠道，为其应用于抗辐射医药、美白医药和保健品等领域的研究奠定实验基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：附表英文缩略词

前言

1海参的生物活性物质研究进展

1.1多糖

1.2甾醇

1.3毒素

1.4脂肪酸

1.5胶原蛋白及多肽

2水产加工废弃物——鱼皮的综合利用

3生物活性肽对皮肤作用的研究

3.1抗氧化活性

3.2抗衰老作用

3.3美白作用

3.4抗肿瘤活性

3.5免疫调节作用

3.6生物活性肽的应用

4水产胶原蛋白多肽生物活性的研究

5研究的目的及意义

第一章日本刺参的抗肿瘤及免疫调节作用研究

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1对荷瘤小鼠S180肉瘤生长、脾指数和胸腺指数的影响

2.2对荷瘤小鼠血清溶血素水平和抗体生成细胞数的影响

2.3对荷瘤小鼠迟发型变态反应和脾淋巴细胞转化率的影响

2.4对荷瘤小鼠NK细胞活力的影响

2.5对荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响

3讨论

第二章日本刺参胶原蛋白多肽对紫外线诱导的光老化模型小鼠皮肤的防护作用

1材料和方法

1.1实验材料

1.2实验仪器

1.3实验方法

2结果

2.1皮肤组织的一般形态学变化（HE染色）

2.2皮肤组织的胶原纤维形态学变化（VanGeison染色）

2.3 AJCP对血清和皮肤组织中抗氧化指标的影响

2.4 AJCP对皮肤组织总Hyp含量的影响

3讨论

第三章不同分子量日本刺参胶原蛋白多肽对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1不同分子量AJCP中游离氨基酸的组成

2.2不同分子量AJCP对B16黑素瘤细胞增殖活力的影响

2.3不同分子量AJCP对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

2.4不同分子量AJCP对B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响

2.5不同分子量AJCP对B16黑素瘤细胞酪氨酸酶mRNA表达的影响

2.6不同分子量AJCP对GSH和GSSG含量的影响

2.7不同分子量AJCP对cAMP含量的影响

3讨论

第四章鱿鱼皮胶原蛋白多肽对紫外线诱导的光老化小鼠皮肤的防护作用

1材料和方法

1.1实验材料

1.2实验仪器

1.3实验方法

2结果

2.1皮肤组织的一般形态学变化(HE染色)

2.2皮肤组织的胶原纤维形态学变化(VanGeison染色)

2.3 SSCP对血清和皮肤组织中抗氧化指标的影响

2.4 SSCP对皮肤组织总Hyp含量的影响

3讨论

第五章不同分子量鱿鱼皮胶原蛋白多肽对B16黑素瘤细胞黑素合成的影响

1材料和方法

1.1材料

1.2方法

2结果

2.1不同分子量SSCP中游离氨基酸的组成

2.2不同分子量SSCP对B16黑素瘤细胞增殖活性的影响

2.3不同分子量SSCP对B16黑素瘤细胞黑素含量的影响

2.4不同分子量SSCP对B16黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响

2.5不同分子量SSCP对B16黑素瘤细胞酪氨酸酶mRNA表达的影响

2.6 SSCP对GSH和GSSG含量的影响

2.7不同分子量SSCP对cAMP含量的影响

3讨论

结论

本论文的特色及创新之处

参考文献

硕士期间发表论文情况

致谢