皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)微量金属元素锌及其与铜的交互作用的营养生理研究

摘要

本文主要研究了饲料中锌的过量和缺乏、锌铜的交互作用对皱纹盘鲍生长、生理和抗氧化能力的影响，并探讨了饲料中的锌和铜对鲍鱼体内金属相关蛋白——金属硫蛋白基因表达的作用。 实验一利用单因素实验设计研究了在精制饲料中以ZnSO4·7H2O为锌源添加不同浓度的锌(0添加、正常量即最低需求量35mg/kg、过量即正常量的100倍)，投喂给皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)稚鲍，进行养殖实验28周后，鲍鱼生长存活、体成分、体内相关金属元素的含量以及肝胰脏中的碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力和总抗氧化力(T-AOC)，来探讨饲料中锌的缺乏和过量对皱纹盘鲍的影响。实验结果表明，饲料中锌浓度对鲍鱼的成活率(Survival，％)和壳日增长率(DISL，μm/day)影响不显著，投喂正常和过量锌饲料的鲍鱼增重率(WGR，％)显著高于不添加组(P<0.05)；对鲍鱼体成分中的软体部水分(Moisture，％)、脂肪(Lipid，％)以及贝壳灰分(Shell ash，％)影响不显著，但对蛋白含量(Protein，％)有极显著影响(P<0.01)，过量组高于正常和缺乏组；饲料锌浓度对肝胰脏中锌的含量(mg/kg)(P<0.01)以及肌肉中锌(P<0.01)和铁(P<0.05)的含量都有显著影响，都随锌浓度升高而升高，而对贝壳金属元素含量影响不显著；对鲍鱼肝胰脏中AKP、SOD、GPX酶活力都显著影响(P<0.05)，对肝胰脏总抗氧化力有极显著影响(P<0.01)，都随锌浓度升高的而增大。 实验二设计3×3双因素实验，研究了在精制饲料中以ZnSO4·7H2O为锌源添加不同浓度的锌(0添加、正常量35mg/ kg、过量700mg/kg)、以CuSO4·5H2O为铜源添加不同浓度的铜(0添加、正常量4mg/ kg、过量80mg/kg)后，投喂给皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai Ino)稚鲍，进行养殖实验28周后，鲍鱼生长存活、体成分、体内相关金属元素的含量以及肝胰脏中的碱性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)活力和总抗氧化力(T-AOC)，来探讨饲料中微量元素锌和铜的交互作用对皱纹盘鲍的影响。实验结果表明，饲料中锌浓度显著影响鲍鱼的增重率(WGR，％)和壳日增长率(DISL，μm/day)、鲍鱼软体部蛋白含量(Protein，％)、肝胰脏AKP、SOD、GPX酶活力和T-AOC、肝胰脏中的锌、肌肉中的锌含量(P<0.05)，且与饲料中锌浓度呈正相关，肝胰脏的铁含量也收饲料锌浓度显著影响，但只在饲料中铜足量或过量的情况下，饲料中的充足的锌能促进铁元素在肝胰脏中的积累；饲料中的铜浓度显著影响鲍鱼的增重率和壳日增长率、软体部蛋白含量、肝胰脏中AKP酶活力和T-AOC、肝胰脏中的锌、铜含量和肌肉铜含量(P<0.05)，且与饲料中铜浓度呈正相关；两者的交互作用只对鲍鱼软体部蛋白含量、肝胰脏中AKP酶活力和铁元素的含量有显著影响(P<0.05)，并表现出一定的协同作用。 实验三金属硫蛋白(MT)是一种广泛存在的富含半胱氨酸的蛋白质，主要作用于金属的代谢、重金属解毒，还有例如抗氧化、抗辐射伤害等免疫作用。本实验在用含4个浓度梯度的锌(0添加、正常量35mg/kg、过量700mg/kg和超过量3500mg/kg)和3个浓度梯度的铜(0添加、正常量4mg/kg、过量80mg/kg)共7种饲料投喂给鲍鱼后，取鲍鱼的肝胰脏和外套膜来进行组织特异性的SYBR-Green I荧光实时定量PCR，来确定饲料中的金属元素对鲍鱼体内MT表达量的影响，β-actin为内参基因。荧光实时定量PCR的结果用Detla Detla Cr相对定量法来处理和分析。结果显示肝胰脏的MT表达量分别受饲料锌和铜添加量的显著影响，呈正相关，外套膜MT表达量同样也受饲料锌的显著影响，随饲料锌添加量的增加而升高，但却不受饲料铜含量的影响。可见肝胰脏的金属硫蛋白表达量可以成为今后皱纹盘鲍金属元素营养生理研究的一个有用指标。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章综述

第一节 水产动物微量元素锌营养研究

第二节 动物金属硫蛋白以及金属锌对其表达影响的研究

第二章饲料中锌的缺乏与过量对皱纹盘鲍生长、生理和抗氧化能力的影响

1、前言

2、材料和方法

3、结果与分析

4、讨论

参考文献

附录

第三章饲料中添加不同水平的锌和铜及其交互作用对皱纹盘鲍生长、生理和抗氧化力影响

1、前言

2、材料和方法

3、结果与分析

4、讨论

参考文献

附录

第四章饲料中添加不同水平的锌、铜对皱纹盘鲍金属硫蛋白基因表达的影响

1、前言

2、材料与方法

3、结果与分析

4、讨论

参考文献

附录

致谢