青海藏系绵羊KAP6.1和BMP2基因的克隆、序列分析及其在毛囊活性变化中的定量表达

摘要

本研究采用分子生物学技术和组织学方法对青海藏系绵羊活体皮肤进行了与毛囊生长相关的基因在毛囊不同发育时期的表达水平及对被毛的调控机理的探讨。结果表明:
　　 采用RT—PCR技术成功克隆出青海藏系绵羊KAP6.1基因cDNA序列共381bp，其中包括一个252bp的完全CDS区，编码83个氨基酸；获得藏系绵羊BMP2基因356bp的部分CDS 区，编码118个氨基酸。经序列对比发现：两种基因与普通绵羊、山羊、牛、马、猪、人、大鼠等物种之间均具有高度同源性，其中与普通绵羊同源性达到100％。
　　 采用实时荧光定量PCR技术对VEGF、HGF、IGF-I、KAP6.1和BMP2五种基因 mRNA相对定量的分析表明：全年五种基因在皮肤毛囊中均有不同程度的表达。其中，VEGF、IGF-I、KAP6.1基因 mRNA在二月份最低，八月份的表达水平最高； BMP2基因 mRNA的表达水平在二月份最高，八月份的表达水平最低；HGF基因 mRNA的表达水平从二月份至十一月份呈逐渐上升趋势。
　　 对青海藏系绵羊皮肤切片进行HE染色的组织形态学观察显示：青海藏系绵羊皮肤毛囊在2月份处于休止期、5月份处于兴盛前期、8月处于兴盛期、11月份进入退行期；初级毛囊密度活动变化较次级毛囊密度活动变化恒定，S/ P 值明显低于其它品系绵羊；毛囊群以一元体和二元体毛囊群居多，三元体毛囊群较少。