转基因食品基因芯片检测及鉴定方法的建立

摘要

为保障我国转基因食品标识制度的顺利实施,本文选取了已经或即将商业化种植的转基因玉米MIR162、BVLA430101、MON88017,转基因大豆MON89788、GTS40-3-2,转基因油菜MS1、RF1为研究对象,应用寡核苷酸基因芯片技术建立了7种转化事件特异性检测方法。 本研究主要分为以下四个部分: 1、第一章综述了转基因技术在农业生产和食品工业上的应用,不同国家间的转基因标识制度比较以及常用的转基因检测技术,并简要介绍了本文研究对象的背景材料。 2、根据外源基因与植物基因组DNA的重组结构,利用Primer Express 3.0软件分析并设计MIR162、BVLA430101、MON88017、MON89788、GTS40-3-2、MS1、RF1转化事件特异性引物,并建立了PCR检测方法。特异性与灵敏度验证结果表明,所建立的七种检测方法特异性强,灵敏度较高(0.1%)。同时,为测试转基因玉米MIR162定性PCR的特异性、灵敏度和重演性,在全国选择6家通过“双认证”的转基因生物安全检测机构对该标准文本进行循环验证、检验测试和综合评价。验证过程中,6家验证单位在MIR162含量为0.1%及以上的样品中均扩增出清晰的目的条带,表明该定性检测方法灵敏度较高,为0.1%,上述结果证明该方法具有良好的特异性、灵敏性和重演性,适合作为该玉米品系转基因成分检测的国家标准。 3、根据定性PCR的扩增靶序列设计40bp大小的基因芯片探针,建立了上述7种转基因品系基因芯片检测方法,特异性和灵敏度验证证明所设计的探针对PCR扩增产物识别的特异性强,灵敏度高(0.01%)。 4、利用复合PCR-基因芯片联用技术,建立了一个三重PCR检测体系(MIR162、MON89788、18S rRNA)和两个四重PCR检测体系(MIR162、MON88017、MON89788、18S rRNA和MON88017、MS1、RF1、18S rRNA),进一步提高了检测通量。

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第一章 转基因技术应用及其产品检测方法研究进展

1.1 转基因技术应用

1.2 不同国家转基因食品标识制度比较

1.3 转基因检测常用方法

1.4 我国转基因植物及其产品成分检测流程

1.5 试验中所用材料的背景介绍

第二章 定性PCR检测方法的建立

2.1 前言

2.2 材料与方法

2.3 结果与分析

2.4 讨论

2.5 致谢

第三章 基因芯片检测方法研究

3.1 前言

3.2 材料与方法

3.3 结果与分析

3.4 讨论

第四章 复合PCR-基因芯片联用检测方法

4.1 引言

4.2 材料与方法

4.3 结果与分析

4.4 讨论

第五章 结论

参考文献

附录1 文中所用化学溶剂的配制

附录2 文中转基因检测的全部扩增靶序列及引物位置

硕士期间发表和待发表成果