枸杞多糖对大剂量化疗后小鼠睾丸生精功能的影响

摘要

目前临床上治疗肿瘤和一些免疫系统疾病时,采用大剂量放疗或在应用大剂量化疗药物时,在机体“容忍”的剂量下,部分受者睾丸内的SSCs破坏严重,甚至殆尽,致非梗阻性无精子症形成。随着现代医学的发展,青春期前肿瘤患者的临床治愈率已超过70％,但这些肿瘤治愈的患者中有15%需长期面对由化疗或放疗所引起的不育问题。然而,对于青春期前的淋巴瘤或白血病、精索静脉曲张以及腮腺源性睾丸炎等生精功能阻滞的非梗阻性无精子症患者,目前医学尚无有效的治疗方法。枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharides,LBP)是枸杞生物活性功能的主要有效成分。近代药理实验表明,LBP具有免疫调节、抗衰老、降血脂、降血糖、护肝、防辐射、抗疲劳、保护生殖系统、抗肿瘤、抗缺氧等功能。在保护生殖系统方面,有研究表明LBP对生精细胞具有一定的保护作用。本实验拟用白消安建立大剂量化疗致小鼠不育模型,并给予LBP治疗,以c-kit为观察指标检测其生精功能恢复情况,研究LBP对大剂量化疗后小鼠睾丸c-kit因子表达的影响,进一步探寻因大剂量化疗所致不育新的治疗方法。
　　目的：探讨枸杞多糖(Lyciumbarbarumpolysaccharides,LBP)对大剂量化疗后小鼠睾丸生精功能的影响。
　　方法：4~6周龄雄性昆明白(KM)小鼠50只,随机分为化疗+生理盐水组(模型组)、化疗+50mg/kg·d-1LBP组、化疗+100mg/kg·d-1LBP组、化疗+200mg/kg·d-1LBP组(即3个治疗组)和正常对照组,每组10只。观察动物的一般状况,HE染色检测模型的建立情况,采用免疫组化、实时荧光定量PCR以及Western-blot免疫印迹法检测分析LBP对各实验组小鼠睾丸c-kit因子表达的影响。
　　结果：HE染色发现造模成功的小鼠生精小管内细胞层数减少,多数仅存支持细胞,管腔呈空泡样变。免疫组化结果:c-kit在化疗+生理盐水组与化疗+50mg/kg·d-1LBP组中低表达,而在化疗+100mg/kg·d-1LBP组、化疗+200mg/kg·d-1LBP组及正常对照组中则高表达。实时荧光定量PCR检测结果:化疗+生理盐水组、化疗+50mg/kg·d-1LBP组、化疗+100mg/kg·d-1LBP组、化疗+200mg/kg·d-1LBP组、正常对照组的c-kitmRNA相对表达量分别为(5.94±0.11)、(8.58±0.27)、(15.05±0.35)、(15.06±0.21)、(15.27±0.13)。Western-blot免疫印迹法检测结果:化疗+生理盐水组、化疗+50mg/kg·d-1LBP组、化疗+100mg/kg·d-1LBP组、化疗+200mg/kg·d-1LBP组、正常对照组的c-kit蛋白相对表达量分别为(0.48±0.03)、(0.55±0.03)、(1.03±0.06)、(1.08±0.02)、(1.09±0.02)。通过分析发现模型组(化疗+生理盐水组)较正常对照组c-kit因子的表达有明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);用LBP治疗的三个组较模型组c-kit因子的表达均有明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);其中化疗+100mg/kg·d-1LBP组、化疗+200mg/kg·d-1LBP组与正常对照组,三组之间两两比较c-kit因子的表达,差异均无统计学意义(均P>0.05)。
　　结论：LBP可以显著提高大剂量化疗后小鼠睾丸c-kit因子的表达,100mg/kg·d-1可能是LBP对大剂量化疗后小鼠睾丸生精功能恢复的最佳起始剂量。

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前言

材料与方法

1 材料

1.1 实验动物及其分组

1.2 主要试剂

1.3 主要仪器

2 实验方法

2.1 大剂量化疗致雄性小鼠不育模型的制备

2.2 枸杞多糖（LBP）梯度灌胃治疗

2.3 HE染色检测动物模型完成情况

2.4 免疫组化检测 c-kit的表达

2.5 荧光定量 PCR检测 c-kit mRNA的表达

2.6 Western-blot 免疫印迹法检测 c-kit蛋白的表达

2.7 统计学分析

结果

1.1 动物的一般状况

1.2 HE 染色检测不育模型的建立情况

1.3 免疫组化检测 c-kit 的表达

1.4 荧光定量 PCR 检测 c-kit mRNA 的表达

1.5 Western-blot免疫印迹法检测c-kit蛋白的表达

讨论

结论

参考文献

文献综述

致谢

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