黄芪、白芍药对脂溶性成分分析及抗氧化活性研究

摘要

传统中草药是天然抗氧化剂的重要来源，通过清除自由基，还原氧化物质，能够有效的延缓、抑制甚至阻止氧自由基引起的食品腐败变质及一些生理疾病，因此已被广泛应用于食品药品等多个方面。
　　黄芪白芍是可用于保健食品的经典药对，二者与其他中药作为复方在临床上常用来健脾补虚，我国传统汤药“黄芪建中汤”和“五物汤”中都含有这两味中药，现代研究验证这两种方剂对小鼠体内的脂质过氧化和衰老具有很好的抑制效果。本文主要研究了黄芪白芍药对脂溶性成分的抗氧化活性，并通过气相质谱和液相质谱技术，初步分析了亲脂性溶剂提取的黄芪白芍药对的物质基础变化。主要结果如下:
　　1.本研究采用体外抗氧化实验（ABTS和DPPH自由基清除能力、β-胡萝卜素漂白能力）研究了黄芪白芍药对不同亲脂性溶剂（石油醚、氯仿、乙酸乙酯）提取物的抗氧化活性，实验结果表明黄芪白芍药对的抗氧化能力显著高于两味单药的理论加和值，具有显著的协同抗氧化效果。分析药对的多酚和黄酮含量发现，黄芪白芍药对的抗氧化协同作用可能是由于多酚、黄酮含量的变化引起的。
　　2.利用GC-MS分析了黄芪、白芍及药对石油醚提取物的物质成分，共鉴定出15种化合物，其中大多数为高级脂肪酸及其酯化物，尤其以亚油酸、亚麻酸甲酯含量最为丰富。另外在白芍中鉴定出丹皮酚、丁香酚、β-杜松萜烯，在药对中检测出单药中未检出的丁子香烯、β-谷甾醇、羽扇烯酮等均具有一定的抗氧化活性。药对中新检出的物质表明两单药混合提取的过程有可能促进了这些成分的溶出，也可能是由于配伍过程中发生了某些化学反应或物理变化。
　　3.通过油脂的POV值和TBARS值的测定来评价黄芪、白芍及药对乙酸乙酯提取物在大豆油中的抗氧化能力。结果表明黄芪、白芍两味单药及药对均对豆油的氧化有一定的抑制效果，白芍的抑制能力较强，另外研究表明在一定浓度范围内，提取物的抗氧化效果对浓度具有依赖性;等浓度单药和药对与BHT复配后表现出优于单药或BHT单独使用时的抗氧化效果，这说明提取物和BHT之间可能存在协同效应。
　　4.采用HPLC-DAD-MS技术初步鉴定了黄芪、白芍及药对乙酸乙酯提取物的化学成分，共鉴定出16个化合物，主要为黄酮和萜类化合物，其中来自黄芪的化合物多为黄酮类化合物及其苷类，来自白芍的化合物多为单萜类化合物及其苷类。其中，黄芪中的毛蕊异黄酮、芒柄花素、芒柄花苷，白芍中的芍药新苷、白芍苷等分别是黄芪、白芍中的重要活性成分，这些物质结构中均含有多个羟基，具有潜在的抗氧化效果。

目录

声明

符号说明

摘要

1 引言

1．1 中草药在功能食品中的应用

1．2 中药脂溶性成分概述

1．2．1 生物碱类化合物

1．2．2 醌类化合物

1．2．3 挥发油类化合物

1．2．4 鞣质化合物

1．2．5 萜类化合物

1．2．6 甾体类化合物

1．3 中药脂溶性成分鉴定方法

1．3．1 薄层色谱法(TLC)

1．3．2 气相色谱法(GC)

1．3．3 高效液相色谱法(HPLC)

1．3．4 高效毛细管电泳法(HPCE)

1．3．5 原子吸收光谱法(AAS)

1．4 黄芪-白芍药对概述

1．4．1 黄芪主要成分及药理作用

1．4．2 白芍主要成分及药理作用

1．4．3 黄芪-白芍药对

1．5 抗氧化方法评价体系

1．5．1 DPPH自由基清除能力法

1．5．2 Trolox当量抗氧化能力检测法

1．5．3 铁离子还原抗氧化能力检测法

1．5．4 β-胡萝卜素漂白法

1．5．5 抗脂质氧化检测

1．5．6 体内抗氧化实验

1．6 抗氧化物质的作用机理概述

1．6．1 氧化反应

1．6．2 抗氧化剂作用机制

1．7 本研究目的意义及研究内容

1．7．1 研究目的意义

1．7．2 主要研究内容

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．2 主要试剂及配制

2．2．1 主要试剂

2．2．2 相关试剂的配制

2．3 主要仪器设备

2．4 试验方法

2．4．1 黄芪、白芍及药对不同溶剂提取物提取方法

2．4．2 黄芪、白芍及药对不同溶剂提取物抗氧化能力测定

2．4．3 黄芪、白芍及药对不同溶剂提取物中总酚(Singleton et al．，1965)和黄酮含量的测定(Zhishen et al．，1999)

2．4．4 黄芪、白芍及药对石油醚提取物物质成分鉴定

2．4．5 黄芪、白芍及药对乙酸乙酯提取物油脂抗氧化试验

2．4．6 黄芪、白芍及药对乙酸乙酯提取物物质成分鉴定

2．5 数据分析

3 结果与分析

3．1 黄芪、白芍及药对不同溶剂提取物抗氧化能力测定

3．1．1 ABTS·+自由基清除能力

3．1．2 DPPH·+自由基清除能力

3．1．3 β-胡萝卜素漂白能力

3．2 黄芪、白芍及药对不同溶剂提取物总酚和黄酮含量测定

3．3 黄芪、白芍及药对石油醚提取物物质成分鉴定

3．4 黄芪、白芍及药对乙酸乙酯提取物油脂抗氧化能力

3．4．1 油脂过氧化值和硫代巴比妥酸值测定

3．5 黄芪、白芍药对乙酸乙酯提取物物质基础分析

3．5．1 高效液相色谱(HPLC)条件的确定

3．5．2 黄芪白芍药对乙酸乙酯提取物物质基础鉴定

4 讨论

4．1 黄芪、白芍及药对不同溶剂提取物抗氧化活性分析

4．2 黄芪、白芍及药对油脂抗氧化协同作用分析

4．3 黄芪、白芍及药对乙酸乙酯提取物的成分分析

4．4 进一步研究方向

5 结论

参考文献

附录

致谢

攻读学位期间发表论文情况