牛磺鹅去氧胆酸对抗地塞米松诱导小鼠肾上腺皮质细胞系Y1凋亡的研究

摘要

胆汁酸在传统上被认为在脂质吸收和胆固醇代谢中发挥重要作用，近年来，研究发现胆汁酸的作用较为复杂，不仅对脂质代谢，而且可以通过作用于胆汁酸受体FXRα和TGR5在能量代谢、内分泌调节、抗炎和抗细胞凋亡等多方面发挥药理或生理作用。牛磺鹅去氧胆酸(Taurochenodeoxycholic Acid，TCDCA)作为胆汁酸的一类重要的结合型成分，以往研究发现其具有对抗糖皮质激素不良反应的作用，设计本课题就是为了进一步揭示其对抗糖皮质激素不良反应的机制。本课题以肾上腺皮质细胞系Y1作为研究对象，进行了肾上腺皮质细胞系的TGR5受体的干扰，就TCDCA对Y1细胞作用进行系列研究。
　　对肾上腺皮质细胞系Y1的研究如下:采用二苯胺法检测地塞米松诱导Y1细胞凋亡的DNA片段化百分率，结果表明DEX能够增加Y1细胞的DNA片段化百分率。二苯胺法和TUNEL法检测TCDCA对抗DEX诱导Y1细胞凋亡，与模型组相比较每个剂量TCDCA均可以极显著的降低DNA片段化百分率，TUNEL染色结果显示与模型组相比较给药后凋亡细胞数量显著降低，凋亡指数显著减小。实时荧光定量检测DEX对凋亡抑制基因影响结果显示:不同剂量的DEX均能不同程度的上调CIAP-1、CIAP-2、XIAP基因表达量，表明DEX启动了Y1细胞的凋亡程序，但凋亡抑制基因的上调并不是随DEX剂量的增加而持续增加。给予不同剂量的TCDCA后，CIAP-1、CIAP-2、XIAP基因表达量与模型组相比较均有不同程度下调，但与空白对照相比较CIAP-1、CIAP-2、XIAP基因表达量仍然上调。利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖的变化，DEX对Y1细胞的增殖有抑制作用，TCDCA可以极显著的促进Y1细胞的增殖，但DEX和TCDCA联合应用时，TCDCA不表现出促细胞增殖作用。
　　对干扰后的肾上腺皮质细胞系Y1的研究如下:使用RNA干扰技术对细胞系Y1TGR5受体进行基因干扰，荧光定量检测TGR5受体干扰效率，获得干扰效率为47％可稳定传代的细胞系进行以下系列试验。二苯胺法检测DEX对干扰后细胞的DNA片段化百分率，与干扰前相比较DNA片段化百分率无显著变化，二苯胺法检测TCDCA对抗DEX诱导干扰后Y1细胞的DNA片段化百分率，与模型组相比较TCDCA剂量为1μg/mL时，可极显著的降低DNA片段化百分率。实时荧光定量检测DEX对干扰后细胞凋亡抑制基因表达量的变化，不同剂量DEX仍可以上调CIAP-1、CIAP-2、XIAP基因表达，给予不同剂量TCDCA后， CIAP-2、XIAP基因表达量与模型组相比较可显著下调，CIAP-1的表达量无显著变化，与空白对照相比较CIAP-2、XIAP表达量显著上调，CIAP-1的表达量无显著变化。使用CCK-8试剂盒检测干扰后细胞增殖的变化，多个剂量的DEX均可极显著的抑制干扰后细胞的增殖，TCDCA对干扰后的细胞无促增殖作用。
　　从以上结果可以得出如下结论:TCDCA可以对抗DEX诱导的Y1细胞的凋亡，TCDCA可以使凋亡抑制基因CIAP-1、CIAP-2、XIAP的表达下调，TCDCA可以促进Y1细胞的增殖。TCDCA可以对抗DEX诱导干扰后Y1细胞的凋亡，可以使CIAP-2、XIAP的表达下调，TCDCA不能促进干扰后Y1细胞的增殖。