不同辐照剂量对蜜蜂球囊菌的杀灭效果

摘要

养蜂业是我国农业生产的一个重要有机组成部分，但蜜蜂的生长繁殖一直受到各种病原微生物特别是蜜蜂白垩病的危害。蜜蜂白垩病是由蜜蜂球囊菌感染而引起蜜蜂幼虫死亡的真菌性传染病，20世纪90年代初开始在我国暴发流行，以后时有发生，给我国的养蜂生产造成了严重危害。但非常遗憾的是，到目前为止,至今没有有效的防控方法。研究发现，市售蜂花粉中常含有蜜蜂球囊菌，养蜂场在购买此类花粉作为蜜蜂饲料后，蜂群易患白垩病，通过60Co辐照杀灭蜂花粉中的蜜蜂球囊菌是切断白垩病传播途径的有效手段，而目前辐照剂量并不明确，导致辐照效果参差不齐。本研究以蜜蜂球囊菌为研究对象，探究不同辐照剂量对蜜蜂球囊菌的杀灭效果，以期明确有效杀灭蜜蜂球囊菌的最低辐照剂量，为60Co辐照蜜蜂饲料（特别是蜂花粉）时的辐照剂量选择提供依据。
　　本研究利用细菌纯化技术从患白垩病(Bee Chalkbrood Disease)的意大利蜜蜂幼虫体内分离纯化得到蜜蜂球囊菌(Ascosphaera apis)，并结合形态学、乳酸酚棉兰染色以及5.8S rDNA序列分析技术进行鉴定。同时制备不同梯度浓度的A.apis孢子悬液加入到幼虫饲料中，对3日龄意蜂幼虫体外接种试验，利用人工饲养蜜蜂幼虫技术，统计幼虫患病率，通过寇式法计算得出蜜蜂球囊菌对意大利蜜蜂幼虫的半数致死浓度，对添加半数致死浓度的孢子的饲料进行不同剂量辐照处理并进行侵染意大利蜜蜂幼虫实验，最终确定对添加半数致死浓度的蜜蜂球囊菌孢子饲料的最低有效辐照剂量。
　　试验结果表明:从患白垩病的意大利蜜蜂幼虫体内分离纯化得到蜜蜂球囊菌的菌落形态与文献报道一致;显微镜下观察其孢囊直径，孢子球直径和孢子的长宽比等形态特征与文献报道相同或接近;对分离纯化的蜜蜂球囊菌进行分子鉴定，扩增片段大小符合理论值，经与GenBank所公布的蜜蜂球囊菌特异性片段序列做blast对比，重合度99％;计算得出蜜蜂球囊菌对人工饲养条件下的意蜂幼虫的半数致死浓度为5.6×104个/ml;经60Co对添加半数致死浓度的蜜蜂球囊菌孢子饲料进行辐照后饲喂幼虫，在7.0kGy剂量辐照条件下，幼虫患病率与未辐照组有显著差异(P＜0.05)。