摘要
Abstract
缩写表
第一章前言
一、胰岛素概述
(一)、胰岛素的化学组成及生理作用
(二)、胰岛素的物理化学性质
二、胰岛素分子结构与功能的研究
(一)、胰岛素分子及其衍生物
(二)、胰岛素分子的空间结构及分子作用机制
(三)、胰岛素A、B链的相互作用
三、胰岛素多肽天然构象形成过程中二硫键的作用
(一)、二硫键对胰岛素生物活力和结构的影响
(二)、二硫键对胰岛素A、B链重组的影响
四、胰岛素基因工程的发展
五、工作背景介绍
(一)、表达载体
(二)、野生型人胰岛素原基因
六、本文目的及立题依据
第二章实验材料
一、实验材料
二、主要仪器设备
第三章实验方法
一、常用溶液配方
二、实验方法
1质粒DNA的制备
2限制性内切酶解反应及片段回收
3克隆载体的制备
4 PCR定点突变法构建突变型人胰岛素原基因
5体外连接反应
6转化反应
7重组子的筛选及序列测定
8温度诱导重组人胰岛素原基因的表达
9表达产物的分离纯化
10蛋白质的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Native-聚遭受烯酰胺凝胶电泳分析
11自由巯基数量测定
第四章结果与讨论
一、引物设计
二、含编码人胰岛素原基因片段的重组表达质粒的构建
1 PCR定点突变
2连接与转化
3酶切筛选
4温度诱导表达筛选
5 DNA测序鉴定
三、重组表达质粒的表达及胰岛素原的分离纯化
1小量表达与大量表达的比较及诱导时间的选择
2 pLQ106的表达、分离纯化、性质初探及结果分析
3关于温度诱导、包涵体及蛋白复性的讨论
4其他两个突变胰岛素原蛋白的分离纯化结果分析
5未来的工作展望
总结
参考文献
致谢
