线粒体病患者肌肉组织中线粒体氧化磷酸化酶复合体活性变化及意义

摘要

研究目的；一，以正常新鲜和冰冻肌肉组织线粒体组分做对照，利用分光光度法测定不同分离方法制备的新鲜和冰冻肌肉组织线粒体组分OXPHOS活性，分析冰冻保存和不同分离方法对于OXPHOS活性的影响。二，对不同类型线粒体病肌肉组织线粒体OXPHOS活性进行检测，结合临床表现类型和基因突变等资料，揭示OXPHOS活性在不同线粒体病中的变化情况。三，尝试通过OXPHOS分析对线粒体病进行辅助分型。 研究方法；选取我院神经肌肉病理研究室线粒体病患者27例，其中MELAS患者12例、CPEO患者5例、KSS患者3例、线粒体肌肉病3例、Leigh综合症患者2例、其他不定类型患者2例。另选取9例其他肌肉病患者和10例手术取材正常肌肉组织作为对照。跟据肌肉组织保存情况和组织量使用低速或高速离心分离提取线粒体组分，利用各反应前后底物和生成物的浓度变化，采用分光光度计法依次测定复合体Ⅰ-Ⅴ活性，并与自身柠檬酸合成酶活性进行标准化。比较已知各类型线粒体病之间OXPHOS活性的改变情况。 结果；手术标本新鲜与冰冻肌肉组织OXPHOS活性差异有统计学意义，不同的分离方法也会影响复合体的功能。MELAS患者复合体Ⅰ和Ⅲ与正常对比有统计学差异，其中复合体Ⅰ差异最为明显；CPEO患者复合体Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ的活性有统计学差异；1例Leigh综合症患者发现复合体Ⅴ活性减低，与发现的新突变位点吻合。在所有线粒体病患者中，复合体Ⅰ活性减低在各复合体活性改变最为显著。 讨论；OXPHOS测定方法虽然理论比较完善，但实验研究发现由于方法复杂，试剂繁多等原因，各实验室间差异较大；因此，必须严格控制各种实验条件。建议采用新鲜肌肉组织离心后线粒体组分作为研究材料，柠檬酸合成酶活性作为参照。不同类型的线粒体病复合体Ⅰ-Ⅴ活性可能会有不同程度的改变，应结合临床、影像学和遗传学结果共同分析。OXPHOS活性测定可作为进一步证实已知突变的致病机理，或论证新突变的致病性；也可指导研究者缩小基因检测范围，利于发现新的突变位点。线粒体病基因型和临床表型关系复杂，因此目前有顷向通过OXPHOS分析对线粒体病进行辅助分型，虽然分型仍不健全，与本研究发现类似，有学者建议将复合体Ⅰ功能缺失作为一种独立的疾病名称。

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前 言

实验材料

实验方法

结 果

讨 论

结 论

附 图

参考文献

致 谢