中药甘草提取物甘草酸二铵由IL-10依赖途径保护T细胞介导的小鼠肝炎

摘要

肝脏免疫系统的组成非常特别，包含了众多固有天然免疫细胞，如巨噬细胞、NK细胞和NKT细胞。当这些免疫细胞功能异常时，将破坏肝脏内原有的免疫平衡，从而诱发一系列的肝脏病理损伤。ConA是一种T淋巴细胞多克隆激活剂，在体内和体外均可导致淋巴细胞的增殖。ConA诱导的肝炎是一种研究爆发性肝炎的实验模型，同时对于其他的脏器没有影响。NKT细胞、T细胞和巨噬细胞在这个过程中发挥了重要作用。其中包括很多复杂的机制，譬如Fas/FasL系统，穿孔素/颗粒酶系统，IFN-γ，IL-4 and TNF-α介导的损伤等。 甘草酸二铵是一种传统的中药，萃取自甘草。在中药的发展过程中，根据临床经验发现甘草具有抗炎症的作用，因而在肝炎的治疗当中具有重要的作用。甘草酸二铵作为一种中药制剂现在已经在临床上应用于肝炎的治疗，但是其中的机制还不明了。本实验的目的为以Con A诱导的肝炎模型为工具，研究甘草酸二铵对肝脏的保护机制，从而为甘草酸二铵的临床应用提供理论依据。 本研究的主要方法为小鼠接受腹腔预注射DG之后利用尾静脉注射ConA的方法诱发爆发性肝炎。肝脏损伤情况通过血清转氨酶水平和肝脏组织学切片进行检测。细胞因子释放情况通过流式细胞仪和ELISA法进行检测。 结果显示，腹腔预注射甘草酸二铵可降低ConA造成的血清ALT水平，缓解肝脏细调亡情况。同时，肝脏中NKT和T细胞的绝对数量显著下降，暗示了甘草酸二铵预处理可以抑制淋巴细胞向肝脏部位的募集。另外，甘草酸二铵预处理可诱导产生IL-6和IL-10。因此甘草酸二铵可能通过三种途径保护肝脏免受ConA诱导的肝炎的作用：一种为诱导产生IL-6而直接保护肝脏细胞免于调亡；另一种为诱导产生IL-10间接的抑制T细胞造成的炎症；最后，甘草酸二铵预处理可以显著减少肝脏内NKT-细胞和T细胞的数量，从而缓解了ConA诱导的肝炎。

目录

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符号说明

第一章综述

一、肝脏的生理结构和功能

二、肝脏淋巴细胞的组成和功能

三、Con A诱导的暴发性肝炎模型

四、其他的肝脏损伤疾病模型

五、甘草酸二铵的抗炎症作用

参考文献

第二章前言

第三章材料和方法

一、实验动物

二、试剂

三、主要仪器

四、实验方法

五、统计分析

第四章实验结果与讨论

一、甘草酸二铵预处理缓解了T细胞介导的肝脏损伤

1.甘草酸二铵的剂量与治疗效果的关系

2.甘草酸二铵预处理时间与治疗效果的关系

3.ConA注射后转氨酶升高的时间曲线

4.甘草酸二铵对大剂量Con A注射后小鼠存活率的影响

二、DG预处理显著降低了ConA造成的肝脏坏死和肝脏细胞的凋亡

1、甘草酸二铵预注射可缓解肝脏组织的坏死

2.甘草酸二铵预注射降低肝脏细胞的凋亡

三、DG预处理显著降低了由ConA引起的肝脏淋巴细胞募集

1.甘草酸二铵预注射对肝脏内各亚群淋巴细胞比例的影响

2.甘草酸二铵预注射对于肝脏淋巴细胞总数和各细胞亚群总数的影响

四.甘草酸二铵对血清中细胞因子浓度的影响

1.甘草酸二铵对血清中IL-6浓度的影响

2.甘草酸二铵对血清中IL-10浓度的影响

五.流式检测甘草酸二铵对肝脏内IL-10+淋巴细胞数的影响

六、讨论

参考文献

致谢

附录 攻读学位期间发表的学术论文