网腔钙结合蛋白对心房肌细胞瞬时外向钾电流、内向整流钾电流和钠钙交换电流作用的研究

摘要

目的：观察网腔钙结合蛋白对心房肌细胞瞬时外向钾电流、内向整流钾电流和钠钙交换电流的作用，探究网腔钙结合蛋白在房颤发生、发展过程中所扮演的角色，探索房颤发病新的机制。方法：以分离培养的原代乳鼠心房肌细胞为研究对象，随机分为对照组、网腔钙结合蛋白沉默组。实验分为三个部分：1、分离培养乳鼠心房肌细胞并采用免疫细胞化学技术鉴定所分离的细胞为目的细胞； 2、采用shRNA慢病毒质粒转染技术沉默心房肌细胞中网腔钙结合蛋白，通过免疫荧光技术检测质粒转染效率，应用Western Blot检测蛋白沉默效果；3、应用全细胞膜片钳技术检测两组细胞瞬时外向钾电流、内向整流钾电流和钠钙交换电流的改变。结果：1.与对照组相比，网腔钙结合蛋白沉默组乳鼠心房肌细胞瞬时外向钾电流Ⅰ-Ⅴ曲线明显下移，峰电流密度显著降低（22.04±2.84 vs. 13.86±1.64 pA/pF，p=0.02<0.05），差异有统计学意义；2.与对照组相比，网腔钙结合蛋白沉默组乳鼠心房肌细胞内向整流钾电流Ⅰ-Ⅴ曲线内向部分明显下移，峰电流密度显著增加（-8.02±0.85 vs.-12.15±1.66 pA/pF，p=0.03<0.05），差异有统计学意义；3.与对照组相比，网腔钙结合蛋白沉默组乳鼠心房肌细胞钠钙交换电流Ⅰ-Ⅴ曲线外向部分明显上移，峰电流密度显著增加（6.16±0.21 vs. 16.03±2.76 pA/pF，p=0.008<0.05），差异有统计学意义。结论：沉默心房肌细胞中的网腔钙结合蛋白可以使瞬时外向钾电流密度降低、内向整流钾电流内向部分和钠钙交换电流逆向转运电流密度增加，进而缩短动作电位时程、引起细胞内钙超载，可能有利于房颤的发生及维持。

目录

缩 略 语 表

1 引言

2.1 实验动物

2.2 主要实验试剂与实验仪器

2.3 乳鼠原代心房肌细胞的分离与鉴定

2.4 shRNA慢病毒质粒转染沉默网腔钙结合蛋白

2.5 Western Blot技术检测网腔钙结合蛋白表达量的变化[14]：

2.6 全细胞膜片钳技术检测离子通道电流变化

2.7 统计学方法

3 实验结果

3.1 免疫细胞化学技术鉴定乳鼠心房肌细胞

3.2 免疫荧光技术检测shRNA慢病毒质粒转染效果

3.3 Western blot检测网腔钙结合蛋白表达

3.4 全细胞膜片钳技术检测离子通道电流变化

4 讨论

5 结论

参考文献

综述:房颤发病机制研究进展

致谢

作 者 简 介

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