健脾益肾、活血化瘀中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞增殖及FN表达的影响

摘要

目的:糖尿病肾病(Diabeticnephropathy，DN)是糖尿病最为严重的并发症之一，也是导致终末期肾病和糖尿病患者死亡的重要原因。肾小球系膜细胞异常增殖是DN的关键性病理变化，肾小球系膜细胞通过分泌包括纤维连接蛋白(fibronectin，FN)、Ⅳ型胶原(collagenⅣ，ColⅣ)和层纤连蛋白在内的细胞外基质，导致系膜区的扩张并最终导致肾小球硬化。
　　 健脾益肾、活血化瘀中药复方(traditionalChinesemedicine，TCM)对糖尿病肾病具有良好的治疗效果，不仅可减轻临床症状，降低血脂，改善血液流变学异常，减少尿微量白蛋白（microalbuminuria,MALB）和改善肾功能，还可以降低糖尿病肾病模型大鼠增高的一氧化氮水平，降低血脂及尿微量白蛋白。本实验在此基础上，应用高糖(30mmol/L)刺激大鼠肾小球系膜细胞模型，探讨健脾益肾、活血化瘀中药复方对高糖刺激下大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白（fibronectin，FN）表达的影响。
　　 方法:以大鼠肾小球系膜细胞(RMCs)为研究对象，应用不同浓度的中药复方药液(0.3mg/mL、0.65mg/mL、1.25mg/mL、2.5mg/mL)分别处理RMCs24小时及48小时，采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测中药复方对RMCs的毒性。根据毒性实验结果，选择0.3mg/mL、0.65mg/mL、1.25mg/mL中药复方分别处理高糖刺激下的大鼠肾小球系膜细胞24小时及48小时，并在对照组中加入甘露醇做渗透压对照，采用MTT法检测RMCs的增殖情况，实时定量PCR法检测FN的mRNA的表达，ELISA法检测FN蛋白的表达。根据以上实验结果，选用0.65mg/mL中药组处理RMCs48小时，采用Western-blot法检测BMP-7、Smad1/5/8和p-Smad1/5/8的表达。
　　 结果:1、2.5mg/mL中药复方对RMCs具有毒性。2、处理24h，高糖组细胞增殖率是对照组增殖率的1.38倍，处理48h，高糖组增殖率是对照组的1.45倍;处理24h及48h，高糖组FN的mRNA分别是对照组的2.45倍和2.40倍，FN蛋白表达分别是对照组的1.8倍和1.9倍;24h时，中药各组RMCs的增殖及FN的表达与高糖组无统计学差异(p＞0.05)，48h时，0.65mg/mL和1.25mg/mLTCM组RMCs的增殖及FN的表达较高糖组明显下降(p＜0.05)，0.3mg/mLTCM组RMCs的增殖较高糖组有下降趋势。3、高糖处理RMCs48小时，BMP-7的表达量和p-Smad1/5/8的表达与对照组相比明显下降。中浓度中药复方处理高糖刺激的RMCs48小时，BMP-7的表达量和p-Smad1/5/8的表达较对照组明显上升。对照组和各处理组Smad1/5/8的表达未见差别。
　　 结论:高糖处理24h及48h能够使RMCs的增殖增加并上调FN的表达，中药处理24h对高糖刺激的RMCs的增殖及FN表达的抑制作用不明显，中药处理48h能够逆转高糖刺激下RMCs的增殖并下调FN的表达。
　　 高糖处理RMCs48小时能下调BMP-7和p-Smad1/5/8的表达，中药复方能够使高糖刺激下RMCs的BMP-7和p-Smad1/5/8表达上升。

目录

声明

摘要

符号说明

前言

材料与方法

1 标本和试剂

2 主要仪器

3 方法

结果

1 健脾益肾、活血化瘀中药复方对RMCs的毒性实验

2 健脾益肾、活血化瘀中药复方对高糖刺激下RMCs的增殖的影响

3 该中药复方对高糖刺激下RMCs的FN mRNA表达的作用

4 健脾益肾、活血化瘀中药复方对高糖刺激下RMCs的FN蛋白表达的影响

5 健脾益肾、活血化瘀中药复方对高糖刺激下RMCs的BMP-7和Smad1／5／8及p-Smad1／5／8表达的影响

讨论

一 糖尿病肾病

二 中医药治疗与DN

三 BMP-7与糖尿病肾病

结论

参考文献

致谢

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