NF-κB圈套寡脱氧核苷酸抑制角膜移植免疫排斥反应的实验研究

摘要

目的: 研究前房注射NF-kB圈套寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotides，ODNs)对角膜移植免疫排斥反应中的影响，并探讨其在前房内的作用机制。 方法: 1、小鼠穿透性角膜移植动物模型的建立和观察建立三组BALB/C小鼠穿透性角膜移植动物模型，供体角膜植片来自于C57BL/6小鼠。A细：单纯角膜移植组；B组：NF-kB杂码ODNs组；C组：NF-kB圈套ODNs组。B组与c组分别在术中和术后3天、5天前房注射1μg/μl NF-kB杂码ODNs或NF-kB圈套ODNs 2μl。术后定期观察、记录角膜植片的各种变化。 2、角膜移植术后的免疫学和组织病理学检测于术后3、7、14天和/或排斥等不同时间，取各组小鼠对角膜植片和虹膜睫状体进行检测：(1)制作虹膜睫状体铺片，免疫组化分析CD11c、CD80、CD86等的表达；(2)眼球冰冻切片检测CD4<'+>T细胞的浸润情况；(3)石蜡包埋检测角膜植片炎症细胞的浸润。 3、 RT-PCR分析角膜移植术后虹膜睫状体组织中趋化因子受体的表达和细胞因子的分泌于术后3、7、14天等不同时间，RT-PCR检测各组小鼠虹膜睫状体组织内 CCR5、CCR7、IFN-γ、IL-4和IL-12p40 mRNA的表达。 结果: 1、角膜移植术后各组免疫排斥反应发生的平均时间单纯角膜移植组、NF-kB杂码ODNs组、NF-kB圈套ODNs组角膜移植术后发生免疫排斥反应的平均时间分别为15.5±2.4天、13.8±2.6天、22.9±4.8天，三组之间排斥反应时间差异有统计学意义(P=19.691，P=0.000)，C组角膜移植片的存活时间较其余两组延长(P=0.000)。 2、角膜移植术后虹膜睫状体内DC活性标志的变化正常虹膜睫状体铺片，DC的活性标志CD11c、CD80、CD86仅微弱表达，阳性染色的细胞多分布于虹膜近瞳孔缘侧。角膜移植术后A、B组虹膜睫状体中CD11c、CD80、CD86的表达逐渐增多，至术后2周左右排斥时达高峰，阳性染色的细胞在整个虹膜睫状体中均有表达。而同期C组虹膜睫状体中CD11c、CD80、CD86的表达较A、B组明显减少。 3、角膜移植术后CD4<'+>T细胞等炎症细胞的浸润和虹膜睫状体中趋化因子受体mRNA的表达角膜移植术后A、B组植片、虹膜睫状体中有大量炎症细胞以及CD4阳性表达的T细胞浸润，至术后2周左右排斥时达高峰，同时虹膜睫状体中CCR5、CCR7等趋化因子受体mRNA的表达也相应升高。而同期C组局部浸润的炎症细胞以及CD4<'+>T细胞数量较少，虹膜睫状体中CCR5、CCR7等mRNA的表达上升不明显。 4、角膜移植术后虹膜睫状体内细胞因子IFN-γ、IL-12p40、IL-4等mRNA的表达角膜移植术后A、B组虹膜睫状体中IFN-γ和IL-12p40等Th1型细胞因子mRNA转录量升高，而Th2型细胞因子IL-4则无表达。C组各时间点IFN-γ和IL-12p40 mRNA的表达上升不明显，而IL-4转录量升高。 结论: 前房注射NF-kB圈套寡脱氧核苷酸能够有效抑制小鼠角膜移植免疫排斥反应的发生。抑制虹膜睫状体中DC的活化，减少虹膜睫状体内Th1型细胞因子的分泌，增加Th2型细胞因子的分泌，可能是其在前房内的抗排斥作用机制。虹膜睫状体DC的活化可能是启动小鼠角膜移植免疫排斥反应的重要环节。

目录

文摘

英文文摘

声明

研究生导师和课题指导小组介绍

前言

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

论文相关图片一

论文相关图片二

论文相关图片三

文献综述NF-κB在角膜生理病理过程中作用研究进展

攻读学位期间研究成果

致谢