B细胞型非霍奇金淋巴瘤细胞株中CHFR基因表达及甲基化的研究

摘要

目的:检测B细胞型非霍奇金淋巴瘤Raji细胞中CHFR基因的表达和甲基化状态，以及去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷对淋巴瘤细胞增殖和凋亡的影响，为临床应用去甲基化药物靶向治疗非霍奇金淋巴瘤提供理论和实验依据。
　　方法:
　　①体外培养非霍奇金淋巴瘤细胞株（Raji细胞），分别以1μmol/L，4μ mol/L，7μ mol/L，10μmol/L去甲基化试剂5-氮杂-2'-脱氧胞苷（5-Aza-2'-dc）处理Raji细胞;
　　②采用RT-PCR方法检测反应性增生淋巴结组织及非霍奇金淋巴瘤细胞株Raji细胞中CHFR基因的表达;
　　③采用RT-PCR方法检测分别经1μmol/L，4μmol/L，7μmol/L，10μmol/L的5-Aza-2'-dc处理后的Raji细胞中CHFR基因的表达;
　　④MS-PCR(甲基化特异性PCR)方法检测Raji细胞株及经10μmol/L去甲基化试剂处理后CHFR基因的甲基化状态;
　　⑤CCK-8检测分别经1μmol/L，4μmol/L，7μmol/L，10μmol/L去甲基化试剂处理后Raji细胞的增殖抑制率;⑥流式细胞术检测分别经分别经1μ mol/L，4μ mol/L，7μ mol/L，10μ mol/L去甲基化试剂处理后的Raji细胞凋亡率。
　　结果:
　　①经RT-PCR检测发现反应性增生淋巴结组织中CHFR基因的相对表达量为0.898±0.07，Raji细胞中CHFR的相对表达量为0.121±0.013，提示Raji细胞中CHFR相对表达量明显低于正常细胞，差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　②RT-PCR检测经不同浓度5-Aza-2'-dc处理后CHFR基因相对表达量分别为0.174±0.012，0.238±0.015，0.318±0.019，0.389±0.009，经5-Aza-2'-dc处理后表达量上升，差异有统计学意义(p＜0.05);
　　③Raji细胞中CHFR基因启动子可见甲基化与非甲基化条带共存的状态，即部分甲基化，经5-Aza-2'-dc处理后甲基化条带变暗，非甲基化条带亮度增加;
　　④分别以1μ mol/L，4μ mol/L，7μmol/L,10μ mol/L的去甲基化试5-Aza-2'-dc处理细胞后，CCK-8检测细胞的抑制率分别为(2.6±0.40)％，(8.8±0.96)％，(12.4±0.61)％，(16.2±1.1)％，随5-Aza-2'-dc浓度的增高，细胞抑制率增加，差异有统计学意义(p＜0.05)。⑤流式细胞术检测未经5-Aza-2'-dc处理的Raji细胞早期凋亡率为（1.724±0.1）％，经1μ mol/L，4μ mol/L，7μ mol/L，10μ mol/L5-Aza-2'-dc处理细胞后，细胞的凋亡率分别为(3.86±0.35)％，(6.27±0.4)％，(9.57±0.33)％，(15.5±0.46)％，细胞凋亡率增加，且在一定范围内凋亡率随5-Aza-2'-dc浓度的增高而增加，差异有统计学意义(p＜0.05)。
　　结论:
　　①CHFR基因表达水平的降低在非霍奇金淋巴瘤的发生发展过程中具有一定作用。
　　②非霍奇金淋巴瘤细胞株Raji细胞中CHFR基因表达的降低与其启动子的甲基化有关。
　　③去甲基化试剂能恢复CHFR基因在淋巴瘤细胞中的表达，并能抑制淋巴瘤细胞的增殖，促进淋巴瘤细胞的凋亡，且具有一定的浓度依赖性，为去甲基化药物应用于淋巴瘤的临床治疗提供了实验及理论依据。