TGF-β1诱导卵巢癌EMT过程中miR-99家族的变化及其对增殖、迁移侵袭的影响

摘要

目的：检测TGF-β1诱导卵巢癌细胞上皮-间质转化过程中miR-99家族表达水平的变化及其对卵巢癌细胞增殖、迁移侵袭的影响，探讨miR-99家族作为判断卵巢癌恶性程度评价指标及其作为治疗靶点的可能性。
　　方法：TGF-β1以浓度梯度及时间梯度分别刺激卵巢癌细胞株 A2780及 SKOV3，Real-time qRT-PCR检测miR-99a、miR-99b及miR-100表达水平变化，Western-blot检测上皮性标志物E-cadherin及间质性标志物Vimentin表达水平变化，CCK-8法检测细胞增殖能力变化，划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力变化，分析miR-99家族表达水平与EMT进程及卵巢癌增殖、迁移侵袭的相关性；miR-99家族各miRNA mimic/inhibitor分别或联合转染卵巢癌细胞株，探索miR-99家族mimic或inhibitor能否抑制TGF-β1对卵巢癌增殖、迁移侵袭的影响。
　　结果：TGF-β1刺激卵巢癌细胞株A2780及SKOV3后：⑴细胞增殖能力呈时间/剂量依赖性增强，最小作用浓度2 ng/mL和最小作用时间12 h即与空白对照组差异有统计学意义（P＜0.01）；⑵与空白对照组相比，miR-99家族各miRNA表达量均明显上升，差异具有统计学意义（P＜0.01）；⑶上皮性标志物E-cadherin较空白对照组表达下降，间质性标志物Vimentin较空白对照组表达上升；⑷细胞迁移侵袭能力均较空白组增强，差异具有统计学意义（P＜0.05）。MiR-99家族各miRNA mimic/inhibitor分别或联合转染卵巢癌细胞株后：⑴与空白对照或阴性对照组相比，miR-99家族各miRNA inhibitor转染组卵巢癌细胞增殖能力增强，且联合转染组的促增殖能力高于各miRNA inhibitor单独转染组，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；⑵与空白对照或阴性对照组相比，miR-99家族各miRNA mimic转染组卵巢癌细胞增殖能力减弱，且联合转染组的抑制增殖能力高于各miRNA mimic单独转染组，差异均具有统计学意义（P＜0.05）；⑶与TGF-β1处理组相比，miR-99家族各miRNA mimic分别与TGF-β1共处理卵巢癌细胞时，各miRNA mimic不能有效抵抗TGF-β1的促增殖作用（P＞0.05），而miR-99家族mimic联合转染与TGF-β1共处理卵巢癌细胞时，可在一定程度上抵抗TGF-β1的促增值作用，差异具有统计学意义（P＜0.05）；⑷与空白对照或阴性对照组相比，miR-99家族mimic转染组可增强卵巢癌细胞的迁移能力、inhibitor转染组可抑制卵巢癌细胞的迁移能力，差异具有统计学意义（P＜0.05）；⑸与TGF-β1处理组相比，miR-99家族inhibitor联合转染组可抵抗TGF-β1的促迁移作用，差异具有统计学意义（P＜0.05）；⑹与空白对照组或阴性对照组相比，miR-99家族 mimic转染组可增强卵巢癌细胞的侵袭能力、inhibitor转染组可抑制卵巢癌细胞的侵袭能力，差异具有统计学意义（P＜0.05）；⑺与TGF-β1处理组相比，miR-99家族inhibitor联合转染组可部分抵抗TGF-β1的促侵袭作用，但差异不具有统计学意义（P＞0.05）。
　　结论：TGF-β1诱导卵巢癌细胞发生上皮-间质转化从而进一步增强其增殖、迁移侵袭过程中miR-99家族表达水平升高，提示miR-99家族表达水平可作为判断卵巢癌恶性程度的潜在指标；使用miR-99家族mimic或inhibitor可抵抗TGF-β1的促增殖及促迁移作用，提示miR-99家族具有作为卵巢癌治疗靶点的可能性。

目录

引言

材料与方法

1 实验材料

2实验方法及步骤

3细胞培养

4 CCK-8检测卵巢癌细胞增殖能力

5细胞转染

6 Real-time qRT-PCR检测miR-99家族表达水平变化

7 Western-blot检测E-cadherin及Vimentin

8数据处理

9 ibidi细胞划痕实验

10 Transwell细胞迁移实验

11 Transwell细胞侵袭实验

12统计学分析

结果

1 TGF-β1对卵巢癌细胞系增殖能力的影响

2 TGF-β1对卵巢癌细胞系miR-99家族表达水平的影响

3 TGF-β1对卵巢癌细胞系E-cadherin及Vimentin表达水平的影响

4 miRNA模拟物和抑制物对miR-99家族表达水平的影响

5 TGF-β1促卵巢癌细胞增殖效应中miR-99家族的作用

6 TGF-β1及miR-99家族对卵巢癌细胞迁移能力的影响

7 TGF-β1及miR-99家族对卵巢癌细胞侵袭能力的影响

讨论

结论

参考文献

综述:上皮-间质转化与卵巢癌及其相关miRNA的调控机制

攻读学位期间的研究成果

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致谢