奶牛囊肿黄体及不同时期妊娠黄体差异蛋白组学研究

摘要

黄体作为一个暂时的分泌器官组织对于奶牛繁殖至关重要，对于发情周期的形成、早期妊娠、早期胚胎的入植、胚胎的维持、妊娠状态的调节都有重要的意义。通过对黄体蛋白质表达及潜在功能分析，可为揭示黄体在奶牛生殖生理过程中的作用机理提供了一种新的研究角度。本实验通过双向电泳技术建立黄体蛋白表达图谱，通过PDQuest8.0软件对图谱进行分析，分别比较不同黄体间的差异蛋白，并对差异蛋白斑点进行质谱鉴定。
　　通过比较不同制备方法、不同规格IPG胶条、不同浓度SDS-PAGE胶浓度，优化试验条件和相关的参数，建立奶牛黄体双向电泳蛋白图谱。最终选定TCA-丙酮沉淀法制各样品，18 cmpH4～7的IPG胶条及12％的SDS-PAGE凝胶浓度，得到了高质量的蛋白点，分离得到1071个左右的蛋白点的奶牛黄体蛋白2-DE图谱。
　　通过双向电泳技术，对正常黄体和发生囊肿黄体组织进行分析，分析获取8个差异蛋白点，质谱成功鉴定出6个:α-1-酸性蛋白，胶质酸性蛋白，核磷蛋白，牛血清白蛋白晶体结构A链，丝氨酸蛋白酶抑制蛋白，泛素羧基末端水解酶，其中α-1-酸性蛋白可能与黄体囊肿发生或相关组织造成的炎症反应有关，胶质纤维酸性蛋白可能与黄体囊肿造成的激素分泌的异常有关，核磷蛋白本身不仅参与卵巢正常的生理生化过程还可能参与了黄体囊肿的发生，泛素羧基末端水解酶可能与卵巢的发育和卵黄的发育有关。
　　通过双向电泳技术对不同时期黄体进行研究，将黄体分为未妊娠黄体组、妊娠三个月黄体组和妊娠六个月黄体组，成功鉴定出了6种蛋白质:26s蛋白酶体非酶调节亚基蛋白，纤维蛋白原γ多肽，DNA拓扑异构酶蛋白，核纤层蛋白β，硫氧还原蛋白，微管蛋白β-5链，26s蛋白酶体调节亚基蛋白可能与妊娠胚胎的早期活动有关，纤维蛋白原γ可能与妊娠的维持作用有关，DNA拓扑异构酶可能与黄体的形成有关，核纤层蛋白随着妊娠期的增长表达量在减少可能与黄体细胞的活性有关，硫氧还原蛋可能与黄体的维持调控有关。
　　本研究建立并优化了奶牛黄体蛋白双向电泳技术体系，为黄体蛋白差异蛋白组学研究奠定了技术基础，也为黄体囊肿、黄体的发育相关分子机理的研究提供一定的参考。

目录

声明

论文说明

摘要

文献综述

1 黄体生理研究进展

2 繁殖蛋白组学研究进展

3．研究的背景与意义

第一章 奶牛黄体蛋白质组双向电泳图谱的建立

1．材料与方法

2 实验结果

3 讨论

4 小结

第二章 奶牛黄体囊肿的蛋白组学研究

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

4 小结

第三章 不同时期黄体蛋白组学研究

1 材料与方法

2 实验结果

3 讨论

4．小结

结论

参考文献

致谢

附录

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