生理活性酶对水溶性药物经皮吸收促进作用的研究

摘要

本文选择胰脂肪酶和胰蛋白酶作为生物化学促进剂，研究其对水溶性化合物经皮渗透性的影响，从而为水溶性大分子化合物的经皮吸收提供有效的促渗方法。
　　 首先，采用体外经皮渗透实验，考察了0.1％和0.5％的胰脂肪酶对于分子量在400Da到20kDa的范围内的FITC及FDs的经皮吸收促进作用。随着分子量的增加经皮渗透系数逐渐降低。胰脂肪酶对于分子量相对较大的化合物表现出更强的促渗效果。胰脂肪酶与水溶性化学促进剂DMSO及辛酸钠合用，对FD4的经皮吸收未表现出协同促进作用。
　　 通过经活性表皮渗透实验、经培养表皮模型渗透实验、皮肤组织学观察、经皮吸收实验后皮肤荧光照片观察、皮肤DSC分析及ATR-FTIR解析，研究胰脂肪酶对水溶性化合物的经皮吸收促进作用机制。结果表明，胰脂肪酶可以作用于皮肤角质层蛋白质结构和分解角质层中的脂质，从而影响角质层中细胞间透过途径及毛孔等皮肤附属器官促进水溶性大分子化合物的吸收。
　　 另外，本文考察了0.1％和1.0％的胰蛋白酶对于分子量在400Da到250kDa的范围内的FITC及FDs的经皮吸收促进作用。随着分子量的增加经皮渗透系数急剧降低。胰蛋白酶对水溶性化合物的经皮吸收促进作用随着分子量的增加有增大趋势。
　　 通过经培养表皮模型渗透实验、皮肤及培养表皮组织学观察、FD4经皮吸收实验后皮肤荧光照片的观察及ATR-FTIR解析，研究了胰蛋白酶对水溶性化合物的经皮吸收促进作用机制。结果表明，胰蛋白酶通过改变皮肤角质层蛋白质构象及其对角质层蛋白质的分解作用，影响皮肤的屏障功能，促进水溶性大分子化合物通过皮肤角质层细胞间途径和毛孔等皮肤附属器官而吸收。
　　 FITC标记胰岛素体外经皮吸收实验结果表明，采用0.1％胰脂肪酶和0.25％胰蛋白酶对皮肤预处理后，皆对FITC标记胰岛素的经皮吸收表现出显著的促进作用。在胰脂肪酶和胰蛋白酶的作用下，FITC标记胰岛素均可通过角质层的细胞间透过途径和毛孔等附属器官透过途径而吸收。
　　 最后，本文对胰脂肪酶和胰蛋白酶的皮肤刺激性进行了考察，实验结果表明，0.5％胰脂肪酶无刺激性，1.0％胰蛋白酶表现为轻度刺激性。

目录

文摘

英文文摘

缩略语表

药品、试剂、动物与仪器

前言

第一章 胰脂肪酶对FITC及FDs经皮吸收促进作用考察

1 FITC及FDs分析方法的建立

1.1 检测波长的选择

1.2 标准曲线的制备

1.3 回收率和精密度考察

2 胰脂肪酶对FITC及FDs体外经皮渗透性的影响

2.1 实验方法

2.2 实验结果与讨论

3 胰脂肪酶与化学促进剂合用对FD4体外经皮渗透性的影响

3.1 实验方法

3.2 实验结果与讨论

4 胰脂肪酶对水溶性大分子化合物经皮吸收促渗机理的研究

4.1 胰脂肪酶对FD4经活性表皮渗透性的影响

4.2 胰脂肪酶对FD4经培养表皮渗透性的影响

4.3 胰脂肪酶对皮肤及培养表皮组织学的影响

4.4 FD4经皮吸收途径的考察

4.5 采用示差扫描量热法(DSC)进行皮肤构造解析

4.6 采用傅立叶变换衰减全反射红外光谱解析胰脂肪酶经皮促渗机理

5 本章小结

第二章 胰蛋白酶对FITC及FDs经皮吸收促进作用考察

1 FD70及FD250分析方法的建立

1.1 检测波长的选择

1.2 标准曲线的制备

1.3 回收率和精密度考察

2 胰蛋白酶对FITC及FDs体外经皮渗透性的影响

2.1 实验方法

2.2 实验结果与讨论

3 胰蛋白酶对水溶性大分子化合物经皮吸收促渗机理的研究

3.1 胰蛋白酶对FD4经培养表皮渗透性的影响

3.2 胰蛋白酶对皮肤及培养表皮组织学的影响

3.3 FD4经皮吸收途径的考察

3.4 采用傅里叶变换衰减全反射红外光谱解析胰蛋白酶经皮促渗机理

4 本章小结

第三章 胰脂肪酶及胰蛋白酶对胰岛素经皮吸收促进作用考察

1 胰岛素高效液相分析方法的建立

1.1 色谱条件

1.2 色谱图

1.3 标准曲线的制备

2 胰岛素在PBS及皮肤匀浆中的稳定性

2.1 实验方法

2.2 实验结果及讨论

3 胰岛素经皮吸收实验吸收介质的选择

3.1 实验方法

3.2 实验结果及讨论

3.3 胰岛素在吸收介质中的稳定性

4 FITC标记胰岛素体外经皮渗透实验

4.1 FITC标记胰岛素分析方法

4.2 FITC标记胰岛素体外经皮渗透实验

5 FITC标记胰岛素经皮吸收途径的考察

5.1 组织切片的制备

5.2 实验结果与讨论

6 本章小结

第四章 胰脂肪酶及胰蛋白酶对皮肤的刺激性评价

1 实验方法

1.1 样品的配制

1.2 刺激性实验方法

1.3 皮肤反应评判标准

2 结果与讨论

3 本章小结

全文结论

参考文献

致谢

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