植物乳杆菌碳源限制性培养条件下传代1000代过程中实验室进化特性的研究

摘要

本课题以益生菌Lactobacillus plantarum P-8（L.plantarum P-8）为研究对象，将其在碳源限制性（含葡萄糖0.02％）MRS培养基传代过程中保藏的0代和1000代菌株活化后，对菌株的生理生化和益生特性进行检测，并对菌株1000代的基因组进行重测序分析，对其实验室进化进行研究。
　　结果表明，连续培养1000代过程中，其细胞形态未发生变化，菌体活力变化差异不显著，活菌数与浊度变化基本维持不变;其对pH2.5人工胃液、pH8.0人工肠液和0.3％胆盐耐受性无显著性差异(p＞0.05)，菌体的自凝集率未发生差异性改变(p＞0.05);其1000代重测序列较0代序列有6个单核苷酸多态性突变位点，6个插入位点和9个缺失位点，其中单核苷酸多态性突变位点数量较少，多数为高频突变。
　　益生菌L.plantarum P-8在MRS碳源限制性培养基中培养1000代过程中，虽然有较少突变位点发生，但其表型特征和益生特性保持稳定，未发现衰退现象。

目录

声明

摘要

1 引言

1．1 益生菌

1．2 益生菌L．plantarum P-8

1．2．1 益生菌L．plantarum P-8的来源

1．2．2 益生菌L．plantarum P-8的益生特性

1．2．3 益生菌L．plantarum P-8的基因组学研究

1．3 乳酸菌环境胁迫研究概况

1．4 基因组重测序技术

1．5 微生物实验室进化研究

1．6 立题意义与研究内容

2 材料与方法

2．1 菌株来源

2．2 主要试剂

2．3 主要仪器设备

2．4 试验方法

2．4．1 益生菌L．plantarum P-8在碳源限制性培养基中培养方法

2．4．2 益生菌L．plantarum P-8生长情况检测

2．4．3 益生菌L．plantarum P-8益生特性研究

2．4．4 菌株纯度检测

2．4．5 L．plantarum P-8基因组重测序分析

2．4．6 L．plantarum P-8基因组数据分析

2．4．7 数据分析

3 结果与分析

3．1 L．Plantarum P-8 0代菌株生长曲线的绘制

3．2 L．plantarum P-8 1000代菌株生长曲线的绘制

3．3 L．plantarum P-8传代期间生长情况

3．3．1 L．plantarum P-8细胞形态观察

3．3．2 L．plantarum P-8菌株活力变化

3．3．3 L．plantarum P-8活菌数变化

3．3．4 L．plantarum P-8 OD600变化

3．4 L．plantarum P-8传代期间的益生特性

3．4．1 L．plantarum P-8在人工胃液中的耐受能力

3．4．2 L．plantarum P-8在人工肠液中耐受能力

3．4．3 L．plantarum P-8胆盐耐受能力

3．4．4 L．plantarum P-8菌体自凝集能力

3．5 L．plantarum P-8在实验室进化期间基因组分析

3．5．1 L．plantarum P-8菌株DNA纯度检测

3．5．2 L．plantarum P-8基因组重测序分析

3．5．3 SNP突变位点分析

3．5．4 碱基插入与缺失分析

4 结论

致谢

参考文献

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