中华鼢鼠成纤维细胞体外培养建系及其生物学特性分析

摘要

中华鼢鼠（Mospalax fontanieri）为鼹形鼠科、鼢鼠亚科、鼢鼠属动物，目前还没有该动物成纤维细胞建系及细胞生物学特性的研究。作为蒙古高原代表性动物遗传资源，本研究采集中华鼢鼠9种组织用于实验，其中气管、肺和剑状软骨3种组织成功建立成纤维细胞系并分析了这些细胞的生物学特性。主要实验方法是通过细胞计数法计算细胞的贴壁率、冻存前及复苏后的存活率、绘制细胞生长曲线；制备常规染色体标本分析染色体核型；采用DNA测序方法测定中华鼢鼠线粒体DNA的Cyt-b，D-loop，ND4基因序列，评价其进化地位。
　　实验结果显示：中华鼢鼠气管、肺、软骨3种组织在体外条件下培养第3~4天出现成纤维样细胞，分别在培养第11天、第16天、第17天原代细胞90%以上汇合。3种组织来源体细胞均显示成纤维细胞特征，气管成纤维细胞贴壁能力最强，24h贴壁率最高能达到98.10%，肺成纤维细胞与剑状软骨成纤维细胞贴壁能力较弱，24h贴壁率最高，分别为95.28%和94.88%。3种不同组织来源成纤维细胞冻存成活率均显著下降，P4~P8气管成纤维细胞存活率为：冻存前98.92%~93.20%，复苏后91.57%~73.25%，P4~P8肺成纤维细胞存活率为：冻存前98.92%~89.33%，复苏后89.97%~70.21%，P4~P6剑状软骨成纤维细胞存活率为：冻存前98.52%~82.91%，复苏后88.23%~69.06%。3种成纤维细胞的生长曲线均呈“S”型，其中气管成纤维细胞增殖能力最强，在24孔板的每个孔中，其最大增殖数目为2.435×104个，肺成纤维细胞最大增殖数目为1.813×104个，剑状软骨成纤维细胞最大增殖数目为1.521×104个。核型分析结果显示，中华鼢鼠的成纤维细胞染色体数目为2n=62，30对为常染色体，形态类型为2st+28sm。第1对染色体最大为近中着丝粒染色体。其余28对染色体均为亚中着丝粒染色体，性染色体X为中部着丝粒染色体。系统发育树分析结果表明，鼢鼠来源于2个不同的母系祖先，且中华鼢鼠与高原鼢鼠的亲缘关系最近。综上所述，本研究成功建立了中华鼢鼠成纤维细胞建系技术及体细胞系，并揭示了该物种成纤维细胞的基本生物学特性，评价了中华鼢鼠的系统进化地位，为进一步研究其遗传及物种进化提供了重要的实验材料和参考依据。

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