miR-17~92基因簇靶向调控BIM、PTEN影响卵巢癌耐药

摘要

目的
　　 探讨miR-17～92基因簇是否通过靶向调控BIM、PTEN影响卵巢癌耐药，为卵巢癌耐药机制的研究提供理论依据。
　　 方法：
　　 通过软件预测miR-17～92潜在调节的靶基因，用双荧光素酶报告基因检测潜在调节的靶基因荧光表达值的变化，确定miR-17～92基因簇对潜在调节的靶基因的直接结合作用。用脂质体法将pEGFP-N1-miR-17～92过表达质粒及其抑制质粒miR-17～92-PTIP-Sponge all分别转入卵巢癌SKOV3、SKOV3-TR30细胞，用Realtime-PCR方法及Western-Blot方法分别检测SKOV3、SKOV3-TR30及转染后细胞中miR-17～92和BIM、PTEN的表达。
　　 结果：
　　 1、软件预测miR-17～92潜在调节的靶基因可能是BIM、PTEN。
　　 2、荧光素酶结果显示，含有miR-17-5p/-20a和miR-92结合位点的BIM2片段和含有miR-19和miR-92结合位点的BIM3片段的荧光素酶水平比对照下降分别为76.25％和93.75％(P＜0.05)。没有任何miR-17～92基因簇结合位点的B1片段，荧光素酶报告基因试验显示其荧光素报告基因水平降低了8.5％(P＜0.05)。过表达miR-17～92基因簇能够降低PTEN3'UTR报告基因质粒的荧光素酶水平，和对照的pGL-3-P质粒相比，PTEN3'UTR荧光素酶报告基因质粒的荧光素酶水平下降了42.6％(P＜0.05)，而对PTENmut没有明显影响。
　　 3、转染pEGFP-N1-miR-17～92质粒于卵巢癌SKOV3细胞中，转染效率达到70.0％。转染miR-17～92-PTIP-Sponge all抑制质粒于耐药卵巢癌细胞SKOV3-TR30中，转染效率达到99.0％。
　　 4、Realtime-PCR方法检测SKOV3、SKOV3-TR30及转染后细胞中miR-17～92存在差异表达。
　　 5、Western-Blot方法检测SKOV3、SKOV3-TR30及转染后细胞中BIM存在差异表达;miR-17～92基因簇可以使BIM蛋白表达下降，对PTEN蛋白表达的影响不明显。
　　 结论：
　　 1、BIM、PTEN是miR-17～92基因簇的靶基因。
　　 2、miR-17～92基因簇与卵巢癌耐药有关。
　　 3、miR-17～92基因簇影响卵巢癌耐药的机制是通过下调BIM蛋白而非PTEN蛋白参与。

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