1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)对PC12细胞生存率和突触素表达的影响

摘要

目的：
　　本研究主要观察不同浓度的1-甲基-4-苯基-吡啶离子(MPP+)作用于PC12细胞，随着时间的推移，PC12细胞生存率的变化趋势，观察PC12细胞的一种突触蛋白即突触素（synaptophysin）表达变化。本研究旨在建立与帕金森病相关的细胞损伤模型，为帕金森病的进一步研究提供基础实验依据。
　　方法：
　　1、PC12细胞培养和传代:将PC12细胞培养在玻璃培养瓶中，加入DMEM培养基，置于50mL/LCO2孵箱37℃湿化培养，每2天换液一次，当细胞铺满85％-90％瓶底时，0.25％胰酶消化，按1∶3传代，备用。
　　2、MTT（噻唑蓝）法检测细胞生存率:按MPP+作用时间不同将PC12细胞随机分为5组:A-E组:即MPP+(0h)组～MPP+(96h)组，每组分别培养在不同96孔板中。每组依据MPP+浓度又分为6个亚组（0.1mmol/L、0.3mmol/L、0.5mmol/L、0.7mmol/L、对照组、空白组），每个亚组设6个孔，分别孵0h、24h、48h、72h、96h，对照组加入等剂量PBS溶液，空白组用来调零。
　　3、细胞免疫荧光法检测突触素蛋白表达:实验分组:将PC12细胞培养在6孔培养板中，随机分为6组:A-E组:即MPP+(0h)组～MPP+(96h)组:每孔加入0.3mmol/LMPP+，分别孵0h、24h、48h、72h、96h;F组:即对照组:每孔加入等剂量PBS溶液。免疫荧光染色检测突触素表达。
　　4、数据处理与分析:应用MetaMorph/DP10/BX41显微图像分析系统分析免疫荧光强度A（吸收度），使用SPSS19.0统计分析软件进行方差分析。
　　结果：
　　1、MPP+对PC12细胞增殖具有明显的抑制作用。对照组细胞接种以后随着时间的延长，吸光度值明显增加，细胞迅速生长，细胞数量明显高于给药组。MPP+组:细胞生存率呈时间-剂量-效应关系。同一浓度MPP+组，随着时间延长，细胞生存率逐渐下降，以0.7mmol/LMPP+组下降最明显。同一时间点，随着MPP+组浓度逐渐增高，细胞生存率逐渐下降。
　　2、对照组PC12细胞SYN表达阳性，免疫荧光强度值较高;MPP+组(0.3mmol/L)随着时间的延长，SYN免疫荧光强度值呈时间依赖性下降，各时间点与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论：
　　1、一定浓度范围MPP+对PC12细胞增殖具有明显的抑制作用，它作用于PC12细胞后，可引起PC12细胞的细胞生存率呈时间-剂量依赖性下降，我们可用此药诱导PC12细胞，建立与帕金森病相关的细胞凋亡模型。
　　2、一定浓度(0.3mmol/L)MPP+可以引起PC12细胞的突触素（SYN）表达减少，呈时间依赖性下降。MPP+可以使PC12细胞突触囊泡转运能力下降，神经递质释放受到抑制，突触前膜胞吞/胞吐过程受阻，损伤突触的形成，导致神经细胞间信息的传递、加工和储存出现障碍。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

材料与方法

结果

讨论

结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 神经干细胞移植治疗帕金森病的研究进展

在校期间科研成绩

致谢

个人简介