不同浓度铜离子对人脐静脉内皮细胞增殖、成血管和迁移能力的影响

摘要

目的:探讨不同浓度铜离子对人脐静脉内皮细胞增殖、成血管和迁移能力的影响，筛选最适宜人脐静脉内皮细胞生长的铜离子浓度。
　　方法:人脐静脉内皮细胞株(huvec-c)体外培养，选取4-6代的细胞用于实验。采用分析纯氯化铜(CuCl2)配置不同浓度铜离子溶液，以只含培养基不加铜离子处理因素为标准阴性对照组A;一相同体积的铜离子（Cu2+）终浓度为5μmol/L硫酸铜（CuSO4）溶液为阳性对照组B除去氯离子的影响因素。数据处理采用SPSS16.0统计软件进行，以P＜0.05作为差异具有统计学意义。
　　1.CCK-8法检测huvec-c的增殖能力，将经过不同浓度铜离子处理过后的人脐静脉内皮细胞按照CCK-8试剂盒说明书操作，置于酶标仪450nm波长下分别检测各组细胞的吸光度值，可反映不同浓度铜离子对huvec-c增殖能力的影响。
　　2.Matrigel胶检测huvec-c的成血管能力，将经过不同浓度铜离子处理过后的人脐静脉内皮细胞按照Matrigel胶试剂盒说明书操作，置于倒置相差显微镜下计数管腔数，可反映不同浓度铜离子对huvec-c成血管能力的影响。
　　3.细胞划痕实验检测huvec-c的迁移能力，在生长融合的人脐静脉内皮细胞表面制造划痕，用不同浓度的铜离子作用于划痕表面，观察不同组别划痕愈合的程度，可反映不同浓度铜离子对huvec-c迁移能力的影响。
　　结果:
　　1.CCK-8结果显示，在一定范围内不同浓度的铜离子(2.5、5、25μ mol/L)能有效促进huvec-c的增殖，在5μmol/L铜离子浓度时对huvec-c的促增殖作用最强，而后铜离子浓度继续增加（50、125μmol/L），对huvec-c的增殖能力呈抑制作用。
　　2.Matrigel胶成血管实验提示在一定范围内不同浓度的铜离子(2.5、5μmol/L能有效促进huvec-c的成血管作用，5μmol/L铜离子浓度时对huvec-c的成血管能力促进作用最佳，而后铜离子浓度继续增加（25、50、125μmol/L），对huvec-c的成血管能力呈抑制作用。
　　3.细胞划痕实验提示在一定范围内不同浓度的铜离子（2.5、5μmol/L）能有效促进huvec-c的迁移作用，5μmol/L铜离子浓度时对huvec-c的迁移能力促进作用最佳，而后铜离子浓度继续增加(25、50、125μmol/L)，对huvec-c的迁移能力呈抑制作用。
　　结论:当铜离子浓度为5μmol/L时对人脐静脉内皮细胞的增殖，成血管，迁移能力有较强促进作用。当铜离子浓度过高或过低时，实验结果各项参数都显示其会不同程度影响人脐静脉内皮细胞的状态及功能。因此5μmol/L的铜离子浓度可维持内皮细胞功能于较好状态，有利于血管的发生与重建，具有很好的临床应用前景。

目录

声明

摘要

英文缩略语

1 前言

2．1 实验材料

2．1．2 主要仪器

2．2 实验方法

2．2．1 细胞培养

2．2．2 实验分组

2．2．3 细胞增殖能力检测

2．2．4 细胞成血管能力检测

2．2．5 细胞迁移能力检测

2．3 统计学分析

3 实验结果

3．3 细胞划痕实验检测huvec-c迁移能力

4 讨论

5 结论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 人脐静脉内皮细胞功能的研究进展

攻读学位期间取得的研究成果

致谢

个人简历