DNA氧化损伤标记物8-羟基脱氧鸟苷的毛细管电泳安培检测方法研究

摘要

毛细管电泳是上世纪80年代建立并迅速发展起来的一种新型分离分析技术，具有分离效率高、分析速度快、重现性好及样品用量少等特点，己广泛应用于化学、生命科学、药物和环境分析等领域。
　　 研究表明，活性氧自由基(reactive oxygen species，ROS)如O2-1、O-、HO2·、·OH、H2O2、RO·、ROO·等可导致DNA氧化损伤，这与衰老、肿瘤的发生、恶变以及糖尿病和心血管疾病等密切相关。在二十多种DNA氧化损伤产物中，8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2'-deoxyguanosine，8-OHdG)被公认为是最重要的标志物之一。它与DNA复制与修复过程中，导致鸟嘌呤与胞嘧啶及腺嘌呤与胸腺嘧啶发生错位(G:C→A:T)，碱基脱落及DNA链断裂，诱发DNA点突变有关。8-OHdG将是一种很好的评价致突变和癌变危险的标记物。由于尿中的8-OHdG不能被进一步代谢，因此尿中8-OHdG对评价个体癌变危险或诊断与氧自由基相关疾病方面是一种很有用的标记物，在临床上具有很高的应用价值和推广意义。
　　 要将8-OHdG作为肿瘤标记物用于临床常规诊断，首先要建立一种分析速度快、分离效率高、灵敏度高、选择性好、价廉、易商品化、可用于常规分离检测8-OHdG的方法。本论文的主要工作就是发展了一种基于分子印迹萃取、毛细管电泳-安培检测(capillary electrophoresis-amperometric detection，CE-AD)联用方法。利用一步分子印记固相微萃取预处理尿样，结合毛细管在柱富集技术--动态pH调节进样fdynamic pHjunction)，进一步提高了方法的灵敏度，使其检测限达到2.6 nmol/L(S/N=3)；8-OHdG浓度在10 nmol/L～1.5μmol/L浓度范围内与其峰面积呈现良好的线性关系(R=0.9999)；迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别为1.1％和4.0％，尿样的加标回收率为85.1％。论文中详细讨论了分离电压、检测电位、缓冲液浓度及pH值等因素对分析的影响，确定了最优化的分离检测条件。本方法具有简单、灵敏而高效的特点，并已用于健康人和癌症患者尿中8-OHdG水平的评价，结果令人满意。
　　 论文的另外一部分工作是研究了两种毛细管电泳在柱富集方法(场放大样品堆积和碱堆积)在测定8-OHdG中的应用。论文中详细讨论了两种技术的富集原理，以及各种实验条件对分离检测的影响。在优化的条件下，两种方法对8-OHdG的富集均可以达到20倍。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 文献综述

第一节 毛细管电泳-安培检测研究进展

1.1毛细管电泳概述

第二节 DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷研究进展

1.2 DNA氧化损伤标志物概述

第三节 样品柱上富集技术与分子印迹技术

1.3样品柱上富集技术概述

第二章 CE-AD方法用于尿中8-OHdG的测定

第一节 毛细管电泳-安培检测法(CE-AD)的建立

2.1毛细管电泳-安培检测法的建立

第二节 CE-AD方法用于尿中8-OHdG的测定

2.2 毛细管电泳-安培检测法用于尿中8-OHdG的测定

第三章 其它富集技术在测定8-OHdG中的应用

第一节 场放大柱上富集技术在CE-AD法检测8-OHdG中的应用

3.1放大柱上富集方法建立

第二节 碱堆积富集技术在毛细管电泳测定8-OHdG过程中的应用

3.2碱堆积富集方法的建立

参考文献

致谢