实时荧光定量PCR与普通RT-PCR检测粪肠球菌esp基因的差异

摘要

目的：比较实时荧光定量PCR与RT-PCR检测粪肠球菌毒力因子esp，评价实时荧光定量PCR技术测定粪肠球菌RNA水平的价值。
　　 方法：提取粪肠球菌标准株临床样本总RNA，进行总RNA的DNA酶处理，通过逆转录聚合酶链反应得到cDNA。采用实时荧光定量PCR及普通RT-PCR检测粪肠球菌esp基因的差异。
　　 结果：常规RT-PCR检测可见有阳性扩增条带的最大稀释度为1：103，敏感度是750pg/ul。 SYBR Green I染料法荧光定量PCR在对数稀释为1：105仍有阳性扩增曲线，敏感度是7.5pg/ul，敏感度下限是常规RT-PCR的100倍。
　　 结论：1用普通的RT-PCR及实时荧光定量PCR都可对粪肠球菌mRNA进行定量检测。
　　 2对于粪肠球菌毒力因子esp的检测，实时荧光定量PCR法的灵敏度比普通的两步法RT-PCR高100倍。