论文一 红皮病型银屑病合并金黄色葡萄球菌败血症1例；论文二 BRAF抑制剂Encorafenib(LGX818)诱导BRAFV600E突变的恶性黑素瘤细胞发生细胞衰老及自噬的研究

摘要

目的:
　　探究Encorafenib(LGX818)对体外培养的携有BRAFV600E突变体的恶性黑素瘤细胞增殖作用的影响及其相关作用机制。
　　方法:
　　1.培养携有BRAFV600E突变体的恶性黑素瘤细胞株:A375、G361,实验组用Encorafenib(LGX818)处理,对照组加同等量DMSO。以下所有实验均重复3次。
　　2.MTT、克隆形成实验检测LGX818对A375、G361细胞株增殖的影响。
　　3.流式细胞术Annexin-V/PI双染法检测LGX818对A375、G361细胞株凋亡的影响。
　　4.流式细胞术PI单染法检测LGX818对A375、G361细胞株细胞周期的影响。
　　5.β-半乳糖苷酶染色实验检测LGX818对A375、G361细胞株衰老作用的影响。
　　6.透射电镜检测LGX818对A375、G361细胞株自噬小体产生情况的影响。
　　7.Western Blot检测LGX818对A375、G361细胞株中p-Erk1/2蛋白表达,细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDC6、CDK2,衰老通路相关蛋白p27、p21、pRb,凋亡相关蛋白PARP、Caspase-3、p53,自噬相关蛋白LC3、p62、p-mTOR、pp70S6K的表达情况的影响。
　　8.敲低自噬相关基因LC3,建立LC3稳定沉默的细胞系A375/shLC3和G361/shLC3,LGX818处理细胞后,β-半乳糖苷酶染色实验观察LC3沉默对LGX818诱导的细胞衰老作用的影响,Western Blot检测衰老通路相关蛋白p27、p21、pRb的变化。
　　结果:
　　1.MTT、克隆形成实验检测到LGX818可以抑制A375、G361细胞株的增殖活性。
　　2.流式细胞术PI单染法检测到LGX818可导致A375、G361细胞株细胞周期阻滞于G1期。
　　3.流式细胞术Annexin-V/PI双染法检测到LGX818不能引起A375、G361细胞株发生凋亡。
　　4.β-半乳糖苷酶染色实验检测到LGX818能导致A375、G361细胞株发生细胞衰老。
　　5.透射电镜检测到LGX818能诱导A375、G361细胞株产生自噬小体。
　　6.Western Blot检测到LGX818可以抑制A375、G361细胞株中p-Erk1/2蛋白表达,抑制ERK/MAPK通路活性;下调细胞周期相关蛋白CyclinD1、CDC6使细胞周期阻滞在G1期;上调衰老通路相关蛋白p27,激活pRb使细胞发生衰老;促进自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和p62的降解、抑制mTOR/70S6K通路活化,即减少p-mTOR、pp70S6K蛋白表达而使细胞发生自噬;且并未检测到裂解的PARP、Caspase-3及p53这些细胞凋亡相关蛋白的表达。
　　7.沉默LC3抑制自噬作用后,β-半乳糖苷酶染色实验显示可使LGX818介导的细胞衰老作用减弱。Western Blot显示衰老通路相关蛋白p27表达下降、pRb激活作用减弱。
　　结论:
　　BRAF抑制剂Encorafenib(LGX818)通过诱导细胞发生衰老并伴发自噬,从而抑制BRAFV600E基因突变的恶性黑素瘤细胞株增殖。因此,我们首次揭示了新一代BRAF抑制剂Encorafenib(LGX818)抑制BRAFV600E突变的恶性黑素瘤细胞增殖的一项作用机制,为Encorafenib(LGX818)作为治疗携有BRAFV600E基因突变的黑色素瘤患者提供了分子生物学理论基础。

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论文一 红皮病型银屑病合并金黄色葡萄球菌败血症1例

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参考文献

论文二 BRAF抑制剂Encorafenib(LGX818)诱导BRAFV600E突变的恶性黑素瘤细胞发生细胞衰老及自噬的研究

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结论

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综述 红皮病型银屑病治疗进展

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