MCC 950 INHIBITS OXYDIZED LOW DENSITY LIPOPROTEIN INDUCED CASPASe-1 MEDIATED PYROPTOTIC CELL DEATH IN ENDOTHELIALS CELLS

摘要

目的:
　　程序性死亡是正常生理和病理情况下的一个基本过程。焦亡是一种caspase-1(Cysteine-requiring Aspartate Protease-1，半胱氨酸天冬氨酸酶-1)依赖的细胞程序性死亡。焦亡由炎症小体如NLRP3炎症小体介导，促发许多病理性因素，如卒中、癌症、心肌梗死等。NLRP3炎性小体增加炎症反应，参与许多炎症性疾病，如动脉粥样硬化。很多研究将caspase-1依赖的细胞死亡和ox-LDL(oxygenizedlow density lipoprotein，氧化型低密度脂蛋白)及动脉粥样硬化斑块的不稳定性联cx系在一起。MCC950是新近发现的特异性NLRP3抑制剂，可特异性的抑制NLRP3炎症小体的激活，进一步抑制caspase-1的激活及IL-1β的分泌。动物实验显示MCC950可减轻EAE(Experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)小鼠模型的病变严重程度，对CAPS(Cryopyrin-Associated Auto-inflammatory，CAPS)模型小鼠也有效。
　　因此我们推测，MCC950可能有助于减轻动脉粥样硬化。首先我们将观察动脉粥样硬化的关键因素ox-LDL，是否可诱导内皮细胞凋亡焦亡，接下来，我们将研究mcc950对内皮细胞焦亡的影响。
　　方法:
　　人脐静脉内皮细胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC)，从ATCC公司获得，HUVEC培养方法参照ATCC建议。酶法测定细胞上清液乳酸脱氢酶释放，Hoechst33342和碘化丙啶双染评价细胞膜完整性，TUNEL染色检验DNA完整性，Western Blot法检验caspase-1活性。
　　结果:
　　LDH释放检测结果显示:ox-LDL处理后细胞LDH释放水平明显增加，加用MCC950处理后可显著抑制ox-LDL诱导的LDH释放，其抑制效果与caspase-1特异性抑制剂VX765相似。
　　Hoechst33342/碘化丙啶双染结果显示:ox-LDL组细胞碘化丙啶染色阳性比率显著高于对照组。MCC950+ox-LDL组和VX765+ox-LDL组碘化丙啶染色阳性率均显著低于单独ox-LDL处理组。MCC950+ox-LDL组和VX765+ox-LDL两组之间无显著差异。
　　TUNEL染色结果显示:ox-LDL组细胞TUNEL染色阳性比率显著高于对照组。MCC950+ox-LDL组和VX765+ox-LDL组TUNEL染色阳性率均显著低于单独ox-LDL处理组，MCC950+ox-LDL组和VX765+ox-LDL组之间无显著差异。
　　Western blot分析显示:ox-LDL组激活形式的caspase-1表达显著高于对照组。MCC950+ox-LDL组和VX765+ox-LDL组激活形式的caspase-1表达显著低于单独ox-LDL处理组。MCC950+ox-LDL组与VX765+ox-LDL组之间无显著差异。
　　结论:
　　研究结果表明MCC950可抑制HUVEC细胞的焦亡，未来有望在抑制动脉粥样硬化斑块不稳定性方面发挥作用。

目录

声明

TABLES OF CONTENTS

摘要

ABSTRACT

INTRODUCTION

MATERIAL AND METHODS

2．1 Material

2．2 Cell culture and stimulations

2．3 Release of Lactate Deshydrogenage(LDH)

2．4 Tunnel staining

2．5 Hoechst33342／Propidium iodide staining

2．6 Western blot

2．7 Statistics

RESULTS

4．1 Analysis of Hoechst33342／Propidium iodide

4．2 Analysis of Lactate Dehydrogenase release

4．3 TUNEL staining

4．4 Western blot：Active caspase-1

DISCUSSION

CONCLUSION

REFERENCES

LITTERATURE REVIEW

ACKNOWLEDGEMENTS