HER2小分子干扰RNA对脑膜瘤细胞增殖影响的研究

摘要

目的：应用化学合成的siRNA在体外抑制人脑膜瘤细胞HER2基因的表达，探讨化学合成的siRNA介导的RNAi在脑膜瘤基因治疗的可行性。
　　方法：从新鲜无菌脑膜瘤组织中提取出原代细胞进行培养，并人工纯化、传代。选取免疫细胞化学法鉴定为HER2蛋白表达阳性的脑膜瘤细胞，设计并合成针对HER2基因的小分子干扰RNA，选用阳离子脂质体Lipofectamine（R）2000作为转染试剂，同时设立空白组、空载体组、非特异性siRNA组、及HER2 siRNA组;应用脂质体转染法将siRNA导入纯化的脑膜瘤细胞内，48小时后免疫细胞化学法检测转染后各组脑膜瘤细胞中HER2、Ki-67蛋白的表达。
　　结果：经EMA、Vimetin、HER2免疫细胞化学检测，HER2阳性表达的脑膜瘤细胞原代培养取得成功，经过转染后免疫细胞化学检测显示HER2 siRNA组较空白组、空载体组、非特异性siRNA组的HER2、Ki-67蛋白表达明显下降（P＜0.01）;而空白组、空载体组、非特异性siRNA组的HER2、Ki-67蛋白表达无明显变化（P＞0.05），采用Spearman等级相关分析，提示脑膜瘤细胞中HER2蛋白表达与Ki-67 LI呈正相关(rs=0.616，P＜0.001)。
　　结论：⑴成功进行脑膜瘤细胞的原代培养，并认为脑膜瘤细胞的RNAi及体外药物实验应在第三代即开始进行。⑵在体外实验中，化学合成的特异性siRNA通过RNAi可有效抑制人脑膜瘤细胞HER2蛋白表达。(3) HER2基因沉默后，脑膜瘤细胞ki-67蛋白明显降低，脑膜瘤细胞的增殖能力下降，提示通过RNAi技术有望成为HER2过表达脑膜瘤基因治疗的一种新途径。

目录

声明

摘要

缩略词简表

第1章 引言

第2章 材料和方法

2．1 实验材料

2．1．1 脑膜瘤标本

2．1．2 主要的试剂

2．1．3 主要仪器

2．2 方法

2．2．1 脑膜瘤细胞原代培养

2．2．2 脑膜瘤细胞的传代培养

2．2．3 脑膜瘤培养细胞的形态学观察

2．2．4 脑膜瘤细胞的鉴定

2．2．5 脑膜瘤培养细胞转染

2．2．6 ElivisionTM免疫细胞化学法检查转染后脑膜瘤细胞中HER2、Ki-67蛋白的表达

2．2．7 统计学分析

第3章 结果

3．1 脑膜瘤病理组织学检查

3．2 脑膜瘤原代培养细胞免疫组化鉴定

3．3 脑膜瘤培养细胞形态学观察

3．4 HER2蛋白在转染后各组脑膜瘤细胞中的表达

3．5 Ki-67在转染后各组脑膜瘤细胞中的表达

3．6 HER2及Ki-67在脑膜瘤细胞中表达的相关性

第4章 讨论

第5章 结论

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述 脑膜瘤的分子生物学及发病机制的研究进展