20-羟二十烷四烯酸对绒毛膜滋养细胞和子宫血管平滑肌细胞生物学行为的影响

摘要

目的：子痫前期是一种常见的孕妇多系统紊乱综合征，是母体、胎儿发病率和病死率最高的疾病之一，其发病机制尚不清楚，但具有共同的病理学特征，即子宫螺旋动脉重塑不全。螺旋动脉重塑是正常妊娠的关键。妊娠初期，螺旋动脉管内、外的绒毛膜滋养细胞，与血管内皮细胞、平滑肌细胞相互作用，介导其凋亡，并分泌基质金属蛋白酶(MMPs)降解螺旋动脉管壁的弹性基质，同时分泌无定型类纤维素样物质取代细胞外基质，形成绒毛外滋养细胞及纤维素样物质成为螺旋动脉管壁。重塑中任何环节异常，将导致重塑不全和子痫前期。新近研究表明，花生四烯酸代谢产物20-羟二十烷四烯酸(20-HETE)是血管内皮细胞及平滑肌细胞增殖、凋亡等的重要调节因子，其代谢异常与血管功能紊乱性疾病相关。综合子痫前期、螺旋动脉重塑调控机制以及20-HETE的相关特征，本课题提出:20-HETE作为参与重塑过程及血管维护的多个信号转导系统的上游调控因子，其代谢异常，相关信号不能准确转导，导致螺旋动脉重塑障碍以及血管功能紊乱，引发子痫前期。为证实该假说，本课题应用20-HETE及其抑制剂(HET0016)干预子宫螺旋动脉重塑过程的主要参与细胞（绒毛膜滋养细胞和子宫血管平滑肌细胞），研究20-HETE对绒毛膜滋养细胞、子宫血管平滑肌细胞增殖、凋亡和绒毛膜滋养细胞介导子宫血管平滑肌细胞凋亡的影响，分析20-HETE对绒毛膜滋养细胞浸润过程中MMP-2分泌水平的作用环节。探讨20-HETE对子宫螺旋动脉重塑的影响，可能为子痫前期的发病机制提供新思路。
　　方法：⑴建立传代绒毛膜滋养细胞和传代子宫血管平滑肌细胞单培养以及绒毛膜滋养细胞与子宫血管平滑肌细胞干预模型。⑵药物最佳浓度和作用时间的确定:20-HETE及抑制剂(HET0016)以浓度梯度方式分别干预人绒毛膜滋养细胞(HVT)、人子宫血管平滑肌细胞(HUVSMC)24小时或48小时，MTT法检测细胞增殖情况。⑶HVT迁移能力检测:Transwell小室测定HVT迁移数目。⑷HVT浸润能力检测:RT-PCR测定HVT基质金属蛋白酶-2(MMP-2)mRNA水平，免疫组织化学技术测定HVT MMP-2蛋白表达，ELISA测定HVT培养上清液MMP-2的浓度。⑸HVT和HUVSMC的凋亡测定:流式细胞术。
　　结果：①药物最佳作用浓度及时间:10ng/ml20-HETE作用48h后显著促进HVT、HUVSMC的增殖;10μg/ml HET0016作用48h后显著抑制HVT、HUVSMC的增殖。②20-HETE抑制HVT的迁移能力:HVT单培养时，与对照组相比，20-HETE组的Transwell小室中HVT的迁移数目明显减少;20-HETE与HET0016联合干预组的迁移数目显著减少;HET0016组的迁移数目显著增加。③20-HETE抑制HVT的浸润能力:HVT单培养时，与对照组相比，20-HETE组，HVT MMP-2的转录水平、蛋白表达及上清液浓度明显降低;20-HETE与HET0016联合干预组，其转录水平、蛋白表达及上清液浓度显著降低;HET0016组，其转录水平、蛋白表达及上清液浓度显著升高。④20-HETE抑制HVT和HUVSMC的凋亡:无论HVT、HUVSMC单培养，还是HVT-HUVSMC共培养，与对照组相比，20-HETE组，HVT、HUVSMC的凋亡率明显降低;20-HETE与HET0016联合干预组，HVT、HUVSMC的凋亡率显著降低;HET0016组，HVT、HUVSMC的凋亡率显著升高。
　　结论：20-HETE作为参与重塑过程及血管维护的多个信号转导系统的上游调控因子，能够促进绒毛膜滋养细胞、子宫血管平滑肌细胞的增殖，抑制绒毛膜滋养细胞的浸润能力，抑制绒毛膜滋养细胞、子宫血管平滑肌细胞的凋亡，并强烈抑制绒毛膜滋养细胞介导的子宫平滑肌细胞的凋亡。提示20-HETE及HET0016对子宫螺旋动脉重塑主要参与细胞生物学行为的影响，可导致螺旋动脉重塑障碍以及血管功能紊乱，引发子痫前期。

目录

声明

摘要

英文缩略词

第1章 引言

第2章 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 细胞及药物的处理

2．3 20-HETE及其抑制剂(HET0016)对人绒毛滋养细胞、子宫血管平滑肌细胞增殖的影响

2．4 20-HETE及其抑制剂(HET0016)对人绒毛膜滋养细胞浸润性的影响

2．5 20-HETE及其抑制剂(HET0016)对人绒毛膜滋养细胞、子宫血管平滑肌细胞凋亡的影响

2．6 统计学分析

第3章 结果

3．1 20-HETE及HET0016对人绒毛膜滋养细胞、子宫血管平滑肌细胞的最佳作用浓度和时间

3．2 20-HETE及HET0016对人绒毛滋养细胞、子宫血管平滑肌细胞增殖的影响

3．3 20-HETE及HET0016对人绒毛膜滋养细胞浸润的影响

3．4 20-HETE及HET0016对人绒毛膜滋养细胞、子宫血管平滑肌细胞凋亡的影响

第4章 讨论

第5章 结论与展望

5．1 结论

5．2 展望

致谢

参考文献

攻读学位期间的研究成果

综述 20-羟二十烷四烯酸在血压调节中的作用