赣南枫香树叶提取物体外抗菌及抗肿瘤活性的实验研究

摘要

目的:
　　通过KB法检测赣南枫香树叶提取物对细菌的抑菌作用和微量连续稀释法检测其最低抑菌浓度,观察赣南枫香树叶各提取物抗菌活性;通过检测赣南枫香树叶提取物对K562细胞和S180细胞增殖活性以及凋亡的影响,探讨赣南枫香树叶抗肿瘤作用及其可能的机制。为研究枫香树叶抗菌和抗肿瘤作用活性部位的化学组成及抗菌和抗肿瘤作用机制奠定基础,为枫香树叶进一步开发应用提供实验依据。
　　方法:
　　1、回流提取法及溶剂萃取法提取赣南枫香树叶
　　2、KB法检测提取物体外抗菌作用效果
　　3、微量连续稀释法检测提取物最低抑菌浓度(MIC)
　　4、MTT法检测提取物对K562和S180细胞体外抑制率的影响。
　　5、Annexin V/PI双染法检测氯仿层提取物对K562和S180细胞凋亡的影响。
　　结果:
　　1、得石油醚层、氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层和水层5部分提取物。
　　2、体外抗菌实验结果:在浓度0.01~100mg/ml赣南枫香树叶提取物各萃取层对大肠杆菌、乙型副伤寒杆菌、福氏痢疾杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌和白色葡萄球菌的作用表现不同,其中水层促进细菌生长,其他各萃取层均有不同程度的抗菌作用,而乙酸乙酯层抑菌效果在所测细菌中效果最好,可作为活性部位进行有效成分分离鉴定及进一步生物学活性研究。
　　3、体外抗肿瘤实验结果:在一定浓度范围内,提取物各萃取层可抑制K562和S180细胞的增殖,且呈一定的剂量依赖性,对K562细胞的抑制率大小依次为乙酸乙酯层>氯仿层>水层>正丁醇层;其中氯仿萃取层对K562细胞抑制作用较强且呈量效关系。对S180细胞的抑制率大小依次为氯仿层>水层>乙酸乙酯层>正丁醇层;氯仿层对S180细胞增值抑制作用最强。氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层和水层提取物对K562细胞的IC50分别为:0.858、0.412、2.9和1.091mg/ml;对S180细胞的IC50分别为:0.238、0.471、0.844和0.411mg/ml。流式细胞仪检测枫香树叶氯仿萃取层能诱导K562和S180细胞凋亡并呈剂量依赖关系。
　　结论:
　　1、赣南枫香树叶提取物水层对所测试菌为促进细菌生长,正丁醇层、乙酸乙酯层和氯仿层对所测试菌表现出不同的抑菌效果,其中乙酸乙酯层抑菌效果在所测细菌中效果最好。
　　2、赣南枫香树叶提取物各层对K562细胞和S180细胞均具有不同程度增殖抑制作用。
　　3、氯仿层提取物是可能通过抑制细胞增殖诱导细胞凋亡发挥的抗肿瘤作用。

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第1章 引言

1.1 植物抑菌及抗肿瘤作用的研究现状

1.2 枫香树叶研究现状

1.2.1 枫香树叶概况

1.2.2 枫香树叶生物学活性：

第2章 枫香树叶的分离提取

2.1 实验材料

2.1.1实验主要试剂：

2.1.2实验设备：

2.2 实验方法

2.2.1 枫香树叶采摘

2.2.2 枫香树叶回流提取

2.2.3 减压蒸馏

2.2.4 萃取

第3章 体外抗菌作用的研究

3.1 实验材料

3.1.1 细菌菌种

3.1.3 主要仪器设备净化工作台

3.2 KB法检测提取物的抗菌实验和连续稀释法检测最低抑菌浓度（MIC）

3.2.1 营养琼脂培养基的制备

3.2.2 MH培养基的制备

3.2.3 MH液体培养基的制备

3.2.4 生理盐水的配制

3.2.5 0.05%TTC的配制

3.2.6 主要步骤

3.3 结果

3.3.5 赣南枫香树叶提取物最低抑菌浓度（MIC）赣南枫香树叶不同提取物对所测的同一细菌的最低抑菌浓度有所不同，同一提取物对不同菌的最低抑菌浓度也有所差异。其中正丁醇层对福氏痢疾杆菌抑菌效果最好，其MIC为0.625mg/ml，氯仿层除大肠杆菌外均有抑菌效果，对乙型副伤寒杆菌抑菌效果最好，其MIC为0.625mg/ml。乙酸乙酯层对所测菌株的平均MIC值为最小，表明乙酸乙酯层抑菌效果最好（见表5）。

3.4 讨论与结论

3.4.1 讨论

3.4.2 结论

第4章 体外抗肿瘤作用的研究

4.1 实验材料

4.1.1 细胞株

4.1.2 主要试剂

4.1.3 主要仪器

4.2 体外抑瘤试验

4.2.1 细胞冷冻保存

4.2.2 冻存细胞复苏

4.2.3 肿瘤细胞的传代培养4.2.3.l 无菌操作准备

4.2.4 MTT法检测药物对肿瘤细胞的抑制情况：4.2.4.1 细胞培养

4.5 讨论与结论

致谢

参考文献

综述

3. 枫香树叶的研究方向及应用前景展望