孕期补充DHA对宫内感染仔鼠脑组织S-100B、ROS及IL-1β表达的影响

摘要

目的:
　　通过制备宫内感染致脑损伤的动物模型,研究孕期DHA干预对宫内感染仔鼠脑组织中S-100B蛋白(S-100B)、活性氧(ROS)及白细胞介素-1β(IL-1β)表达的影响,探讨S-100B、ROS及IL-1β与脑损伤的关系以及DHA在宫内感染后对仔鼠脑组织的保护作用。
　　方法:
　　将30只确定第1天怀孕的雌性SD大鼠随机分为:生理盐水对照组(NS组)、脂多糖组(LPS组)及DHA干预组(DHA组),每组10只。DHA组自孕期第1天开始每天每只孕鼠给予DHA130mg灌胃至分娩,LPS组及NS组则同时间给予等容积的无菌生理盐水灌胃至分娩,于孕期第17、18天连续2天给DHA组及LPS组孕鼠腹腔注射LPS,剂量为350ug/kg,而NS组注射等容积(0.6ml)的无菌生理盐水。取各组孕20天、生后第1、3、7天(分别记作G20、P1、P3、P7)的仔鼠脑组织,以及各组孕鼠分娩时的胎盘组织,采用苏木精-伊红染色法(HE染色),在光镜下观察各组孕鼠的胎盘组织及各组不同时间点仔鼠脑组织的病理改变;应用S-P免疫组化法检测各组不同时间点仔鼠脑组织中S-100B及IL-1β的表达情况;采用大鼠活性氧酶联免疫分析试剂盒(ELISA试剂盒)检测各组不同时间点仔鼠脑组织中ROS的含量。
　　结果:
　　1.孕鼠子宫及胎盘组织HE染色:LPS组孕鼠子宫和胎盘组织明显充血、水肿,可见大量中性粒细胞浸润;NS组子宫及胎盘组织细胞排列整齐,无明显充血水肿,未观察到明显的炎性细胞;DHA组介于LPS组及NS组之间。
　　2.仔鼠脑组织HE染色:LPS组仔鼠脑组织出现神经细胞肿胀,甚至有局灶性出血,随着时间的推移,白质内的神经纤维走向紊乱,可见筛网状改变,细胞数量减少;DHA组早期神经细胞有轻度水肿,但无明显局灶性出血,随着时间的推移,白质内神经纤维走向尚规则,未见明显筛网状改变;NS组脑组织神经细胞无水肿,细胞数丰富,随着时间点推移,白质内神经纤维走向规则。
　　3.仔鼠脑组织中S-100B的表达:LPS组脑组织中S-100B的表达在G20时达高峰,P1、P3、P7时渐下降,与NS组相比,在G20、P1、P3、P7时差异均有统计学意义(P<0.01);DHA组脑组织中S-100B的表达,与LPS组相应时间点相比均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),与NS组比较,在G20、P1、P3时差异均有统计学意义(P<0.01),P7时差异无统计学意义(P>0.05)。
　　4.仔鼠脑组织中ROS的表达:LPS组脑组织中ROS的表达在G20时达高峰, P1、P3、P7时渐下降,与NS组相比,在G20、P1、P3、P7时差异均有统计学意义(P<0.01);DHA组脑组织中ROS的表达,与LPS组相应时间点相比均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),与NS组比较,在G20、P1、P3时差异均有统计学意义(P<0.01),P7时差异无统计学意义(P>0.05)。
　　5.仔鼠脑组织中IL-1β的表达:LPS组脑组织中IL-1β的表达在G20时达高峰,P1、P3、P7时渐下降,与NS组相比,在G20、P1、P3、P7时差异均有统计学意义(P<0.01);DHA组脑组织中IL-1β的表达,与LPS组相应时间点相比均明显下降,差异有统计学意义(P<0.01),与NS组比较,在G20、P1、P3时差异均有统计学意义(P<0.01),P7时差异无统计学意义(P>0.05)。
　　结论:
　　1.孕鼠腹腔注射LPS制造宫内感染模型后,HE染色光镜下观察仔鼠脑组织中神经细胞水肿,可见局灶性出血,细胞数量减少,推测宫内感染可导致仔鼠脑损伤。
　　2.与NS组相比,LPS组仔鼠脑组织中S-100B、ROS及IL-1β的表达明显增加,差异有统计学意义(P<0.01),提示宫内感染后大量炎症因子及炎症相关因子的释放在脑损伤的发生、发展中可能起重要作用。
　　3.与LPS组相比,DHA组仔鼠脑组织的病理形态学改变减轻,而且脑组织中S-100B、ROS及IL-1β的表达减少,提示DHA在宫内感染导致的脑损伤中起到一定的抗炎、抗氧化等保护作用。
　　4.发生宫内感染后,仔鼠脑组织中S-100B、ROS及IL-1β的表达存在明显的正相关性。推测它们之间可能通过某个信号通路来介导脑损伤。

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中英文缩略词表

第1章 引言

第2章 材料与方法

2.1材料

2.2 方法

2.3 统计学方法

第3章 结果

3.1孕鼠的一般情况及其分娩情况

3.2各组孕鼠子宫及胎盘组织的HE染色情况

3.3各组仔鼠脑组织的HE染色情况

3.4各组仔鼠脑组织中S-100B的变化

3.5各组仔鼠脑组织中ROS的变化

3.6各组仔鼠脑组织中IL-1β的变化

3.7 S-100B与ROS之间进行相关性分析

3.8 ROS与IL-1β之间进行相关性分析

3.9 S-100B与IL-1β之间进行相关性分析

第4章 讨论

4.1宫内感染致仔鼠脑损伤的动物模型制备

4.2宫内感染与脑白质损伤

4.3 宫内感染致脑损伤后脑组织中S-100B、ROS、IL-1β的表达

4.4 DHA对宫内感染致仔鼠脑损伤的保护作用

第5章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

致谢

参考文献

附图

攻读学位期间的研究成果

综述