第一个书签之前
ABSTRACT
第一章 文 献 综 述
1.1 生物标记物（Biomarkers）与金属硫蛋白（Metallothioneins, MTs）
1.2 生物分子标记与贝类
1.3 贝类金属硫蛋白
1.4 金属硫蛋白的正负调控机制
1.5 金属应答原件（Metal Response Elements, MREs）和金属应答转录因子
1.6 哺乳动物MTF-1的表达调控机制
1.7 本研究的主要内容和意义
1.7.1 本研究的主要内容
1.7.2 本研究的意义
第二章池蝶蚌重金属蓄积量及镉胁迫下
Cd蓄积量及金属硫蛋白水平
2.1 实验材料与设备
2.1.1 实验材料
2.1.2 实验试剂及设备
2.2 实验方法
2.2.1 Cd胁迫实验
2.2.2 重金属含量的检测
2.2.3 金属硫蛋白含量的测定
2.2.4 数据分析方法
2.3 实验结果
2.3.1 池蝶蚌各年龄及各组织中Zn、Cu、Pb和Cd的含量
2.3.2 Cd胁迫下1龄池蝶蚌各组织中Cd的含量
2.3.3 Cd胁迫下1龄池蝶蚌各组织中MT的含量
2.3.4 Cd胁迫下各组织中Cd含量与MT含量的线性关系
2.4 实验讨论
第三章 池蝶蚌金属硫蛋白基因分子特征及表达分析
3.1 实验材料与设备
3.1.1 实验材料
3.1.2 实验试剂
3.1.3 实验设备
3.2 实验方法
3.2.1 总RNA提取
3.2.2 SMART cDNA的合成
3.2.3 引物设计
3.2.4 HsMT基因的克隆
3.2.5 目的片段回收、克隆和测序
3.2.5.1 切胶回收
3.2.5.2 TA克隆
3.2.5.3 感受态细胞的制备
3.2.5.4连接产物转化感受态细胞
3.2.5.5 菌液PCR
3.2.6 生物信息学分析
3.2.7 池蝶蚌HsMT1和HsMT2基因的组织表达谱分析
3.2.7.1 总RNA的提取和cDNA的合成
3.2.7.2 荧光定量PCR引物设计
3.2.7.3 池蝶蚌MT基因的组织表达谱分析
3.2.8 Cd诱导池蝶蚌HsMT1和HsMT2的表达分析
3.2.8.1 池蝶蚌的Cd胁迫
3.2.8.2 Cd诱导池蝶蚌HsMT1和HsMT2的表达分析
3.2.9 含HsMT1和HsMT2基因的大肠杆菌的Cd耐受分析
3.2.9.1 质粒和菌株
3.2.9.2 重组表达载体的构建
3.2.9.3 重组质粒的构建
3.2.9.5重组质粒的抽提
3.2.9.6 转基因大肠杆菌的Cd耐受分析
3.3 实验结果
3.3.1 总RNA的提取及质量
3.3.2 池蝶蚌HsMT1和HsMT2全长序列的克隆
3.3.3 池蝶蚌HsMT1和HsMT2序列分析
3.3.4 池蝶蚌HsMT1和HsMT2序列比较及系统进化
3.3.5 池蝶蚌HsMT1和HsMT2的组织表达分析
3.3.6 Cd胁迫下HsMT1和HsMT2的表达变化
3.3.7 转HsMT1或HsMT2基因的大肠杆菌的Cd耐受性分析
3.4 实验讨论
第四章 池蝶蚌金属硫蛋白基因启动子克隆及功能分析
4.1实验材料与设备
4.1.1实验材料
4.1.2实验试剂
4.1.3实验设备
4.2 实验方法
4.2.1基因组DNA的提取
4.2.2 引物设计
4.2.3 基因组步移
4.2.4荧光素酶报告基因载体的构建
4.2.5 转录因子HsMTF-like的克隆及真核表达载体构建
4.2.5.1 RNA的提取
4.2.5.2 cDNA的反转录
4.2.5.3 转录因子HsMTF-like的克隆
4.2.5.4 转录因子HsMTF-like的真核表达载体的构建
4.2.5.5无内毒素质粒抽提
4.2.6 生物信息学分析
4.2.7 突变启动子载体的构建
4.2.8 HepG2细胞培养
4.2.9双荧光素酶报告基因实验
4.3 实验结果
4.3.1基因组DNA
4.3.2 HsMT1和HsMT2启动子序列特征
4.3.2.1 HsMT1启动子区克隆
4.3.2.2 HsMT2启动子区克隆
4.3.2.3 HsMT1启动子区的预测过程：
4.3.2.4 HsMT2启动子区的预测过程：
4.3.2.5 HsMT1和HsMT2启动子序列分析
4.3.2.6 HsMT1和HsMT2启动子序列比对
4.3.3 HsMT1和HsMT2启动子活性分析
4.3.4 HsMT1和HsMT2截短启动子活性分析
4.3.5转录因子HsMTF-like的克隆及序列分析
4.3.6 HsMTF-like调节HsMT1和HsMT2启动子活性
4.4实验讨论
致 谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
南昌大学;
