声明
英文缩略词表
第1章 前言
1.1泛素-蛋白酶体系统(UPS)概述
1.2 CRL通过7种cullin-基础的RINGE3连接酶和它们导致的生物过程
1.2.1 CRL1
1.2.2 CRL2
1.2.3 CRL3
1.2.4 CRL4
1.2.5 CRL5
1.2.6 CRL7/CRL9
1.3类泛素化
1.4 RING组成成分SAG或ROC1以及NAE为抗癌靶点的可能性
1.5肾癌
第2章 材料与方法
2.1 实验材料
2.1.1 主要实验仪器设备
2.1.2主要实验试剂
2.1.3 实验试剂的配制
2.2 实验方法
2.2.1 细胞培养
2.2.2 细胞克隆形成实验
2.2.3ATPLite细胞增殖实验(ATPLite proliferation assay)
2.2.4HE、免疫组织化学染色(HE staining,IHC)
2.2.5蛋白免疫印迹(western blot)
2.2.6.流式细胞检测细胞周期及细胞凋亡
2.2.8构建质粒(本实验的SAG,ROC1质粒均来自YI Sun实验室,只构建了NAE)
2.2.9质粒提取
2.2.10慢病毒的构建
2.2.11慢病毒载体的包装
2.2.12慢病毒滴度测定(用293T细胞测定)
2.2.13慢病毒感染
2.2.14细胞衰老检测:SA-β-gal染色
2.2.15统计学分析
第3章 结果
3.1 SAG、ROC1、NAE在人肾癌组织中过表达,与患者生存不良有关
3.2下调SAG、ROC1或NAE可抑制肾细胞癌细胞的生长
3.3 沉默 SAG、ROC1、NAE1 诱发 RCC 细胞细胞凋亡, 在 ROC1和SAG沉默的细胞中尤为明显
3.4沉默SAG、ROC1或NAE1可引起RCC细胞G2阻滞和细胞衰老
3.5 BIM沉默部分缓解了因SAG、ROC1或NAE沉默对细胞增殖和存活的抑制作用
3.6 BIM沉默部分挽救因沉默SAG、ROC1或NAE1而诱发的细胞凋亡和衰老
第4章 讨论
4.1SAG(凋亡敏感基因,Sensitive to Apoptosis Gene)
4.2ROC1 /RBX1
4.3NAE
4.4 BIM
4.5主要创新点
4.6不足之处
全文总结
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述:SAG 在细胞凋亡中的作用