水稻条纹病毒（RSV）免疫检测试剂盒研制与应用

摘要

本文在已制备RSV单克隆抗体的基础上，首次研制了基于间接ELISA原理的灰飞虱和植物寄主带毒(RSV)测定的两种免疫检测试剂盒，该试剂盒可应用于RSV与灰飞虱互作关系的科学研究，并直接推广到基层植保部门，辅助病害流行预测预报。本文在实验室条件下从样品稀释度、抗体孵育时间、抗体工作浓度等几个方面对斑点免疫方法(DIBA)进行实验条件优化。通过单雌产卵的方法，利用试剂盒检测灰飞虱亲本及其后代的带毒情况，对江苏13个县(市)田间灰飞虱进行亲和性群体筛选试验，利用试剂盒检测各地灰飞虱带毒率预测病害流行。

目录

摘要

1前言

1.1、水稻条纹病毒(RSV)引起的水稻条纹叶枯病

1.1.1水稻条纹叶枯病的症状及寄主

1.1.2 RSV的病原学

1.1.3 RSV传播介体灰飞虱

1.1.4水稻条纹叶枯病的流行

1.1.5水稻条纹叶枯病的防治

1.2、单克隆抗体及植物病毒免疫学检测

1.2.1单克隆抗体技术

1.2.2单克隆抗体在植物病毒中的应用

1.2.3植物病毒学中常用的免疫检测技术

1.3、论文研究的目的意义及思路

1.3.1论文研究目的意义

1.3.2论文研究思路

2材料与方法

2.1、常用缓冲液配方

2.2、常用试剂

2.2.1 RSV单克隆抗体

2.2.2羊抗鼠二抗

2.2.3其他试剂

2.3、RSV检测方法与条件优化

2.3.1 37℃条件下DIBA方法优化

2.3.2酶标板间接ELISA实验步骤

2.4、免疫检测试剂盒的研制

2.4.1不同温度下实验条件优化

2.4.2试剂盒的存放温度及有效期

2.5、试剂盒的应用

2.5.1灰飞虱亲和性群体筛选

2.5.2灰飞虱携带和传递RSV的特性

2.5.3试剂盒应用及田间病害流行预测

3结果与分析

3.1、实验室条件DIBA法和酶标板间接ELISA法

3.1.1 DIBA实验方法及实验条件的优化

3.1.2 RSV酶标板间接ELISA法检测

3.2、25℃(非实验室)条件下DIBA法条件优化及试剂盒研制

3.2.1不同温度下抗体孵育时间

3.2.2试剂盒有效期

3.2.3 25℃(非实验室)条件下灰飞虱体内RSV检测步骤(试剂盒说明书)

3.2.4 25℃(非实验室)条件下植物组织中RSV检测步骤(试剂盒说明书)

3.3、免疫检测试剂盒的应用

3.3.1灰飞虱亲和性群体筛选

3.3.2灰飞虱携带和传递RSV特性

3.3.3灰飞虱带毒率与病害流行预测

4讨论

4.1、DIBA法与酶标板间接ELISA法

4.1.1 DIBA法与酶标板间接ELISA法比较

4.1.2实验过程中应该注意的问题

4.2、试剂盒研制

4.2.1试剂盒的使用方法

4.2.2试剂盒适用对象

4.2.3试剂盒研究的意义与价值

4.3、试剂盒应用

4.3.1灰飞虱亲和性群体筛选

4.3.2灰飞虱带毒特性

4.3.3灰飞虱带毒率与病害流行预测

参考文献

附录

致谢