米尔贝肟吡喹酮片在犬体内的生物等效性研究

摘要

米尔贝肟吡喹酮片是由米尔贝肟和吡喹酮组成的一种复方驱虫药，在国外已批准上市用于驱除犬胃肠道蛔虫、钩虫、鞭虫、绦虫等寄生蠕虫。米尔贝肟和吡喹酮联合扩大了驱虫谱。本研究在分别建立犬血浆中米尔贝肟和吡喹酮含量测定的高效液相色谱法基础上，按照兽用化学药品生物等效性试验相关规范要求，以米尔贝肟吡喹酮片原研药为参比品，进行国产仿制品生物等效性试验，以确定国产米尔贝肟吡喹酮片和原研药是否具有临床可替代性，为国产米尔贝肟吡喹酮片的临床合理用药提供依据。
　　1.建立犬血浆中米尔贝肟含量检测方法——HPLC法
　　建立犬血浆中米尔贝肟含量测定的HPLC方法。犬血浆中米尔贝肟采用乙腈提取和净化，高效液相色谱紫外检测法测定，外标法定量。流动相为乙睛-水溶液(85∶15)。紫外检测波长为244nm。空白血浆添加米尔贝肟在0.05～10μg/mL范围内线性关系良好(R2＞0.999)，检测限和定量限分别为0.04μg/mL和0.05μg/mL。米尔贝肟空白血浆添加水平在0.05～10.0μg/mL时，批内和批间变异系数分别小于8.771％和8.675％。本方法规定了血浆中米尔贝肟的提取和净化方法，适用于犬血浆中米尔贝肟含量的测定。
　　2.建立犬血浆中吡喹酮含量检测方法——HPLC法
　　建立犬血浆中吡喹酮含量测定的HPLC方法。犬血浆中吡喹酮采用乙酸乙酯提取净化，高效液相色谱紫外检测法测定，外标法定量。流动相为乙睛-水溶液(49∶51)。紫外检测波长为223nm。空白血浆添加吡喹酮在0.1～10μg/mL范围内线性关系良好(R2＞0.999)，检测限和定量限分别为0.05μg/mL和0.1μg/mL。吡喹酮空白血浆添加水平在0.1～10.0μg/mL时，批内和批间变异系数分别小于7.707％和10.536％。本方法规定了血浆中吡喹酮的提取和净化方法，适用于犬血浆中吡喹酮含量的测定。
　　3.米尔贝肟吡喹酮片在犬体内生物等效性试验
　　采用交叉试验设计，18只雄性Beagle犬随机分为2组，每组9只。第一阶段，第一组组动物口服供试品，第二组动物口服参比品;第二阶段，第一组动物口服参比品，第二组动物口服供试品。二阶段给药间隔期为2周。给药前禁食12小时并采集一次空白血样，给药后按预定时间从犬前肢皮下静脉采集血样。犬血浆中米尔贝肟和吡喹酮含量分别采用经验证的犬血浆中米尔贝肟和吡喹酮含量HPLC方法测定。分别将实测的米尔贝肟和吡喹酮的血药浓度-时间数据采用代谢动力学数据分析软件WinNolin6.4进行非房室模型法分析，计算药代动力学参数和生物等效性参数。药动学参数拟合结果表明，犬单次口服米尔贝肟吡喹酮片供试品和参比品后，米尔贝肟的平均消除半衰期(t1/2)分别为29.39h和31.35h，平均达峰时间(Tmax)分别为2.61h和2.78h，平均滞留时间分别为11.83h和11.36h，达峰浓度(Cmax)分别为0.294μg/mL和0.421μg/mL，从0至最后一个可测采样点的药时曲线下面积(AUClast)分别为4.51μg*h/L和4.25μg*h/L;吡喹酮的平均消除半衰期(t1/2)分别为1.68h和1.71h，平均达峰时间(Tmax)分别为1.11h和1.56h，平均滞留时间分别为2.08h和2.34h，达峰浓度(Cmax)分别为1.035μg/mL和1.135μg/mL，药时曲线下面积(AUClast)分别为2.72μg*h/L和2.75μg*h/L。以米尔贝肟吡喹酮片原研产品为参比，受试品中米尔贝肟和吡喹酮的相对生物利用度分别为106.12％和98.91％。药动学研究结果显示，米尔贝肟在犬体内消除缓慢，吡喹酮消除则较迅速。统计学分析表明，米尔贝肟吡喹酮片受试品和参比品中两种活性成分对应的主要药代动力学参数间均无显著性差异(p＞0.05)。
　　采用WINNONLIN6.4版药代参数计算软件分别对米尔贝肟吡喹酮片受试品与参比品的Cmax（经对数转换）、AUC0-t（经对数转换）和AUC0-∞（经对数转换）进行生物等效性检验。受试品和参比品组中米尔贝肟的AUC(0-60h)几何均值比的90％置信区间分别为94.03％-115.79％、Cmax几何均值比的90％置信区间在71.64％-105.85％和之间;受试品和参比品组中吡喹酮的AUC(0-60h)几何均值比的90％置信区间分别为87.59％-105.71％，Cmax几何均值比的90％置信区间在83.43％-98.75％之间。米尔贝肟和吡喹酮的AUClast及Cmax几何均值比的90％置信区间均处于设定范围内，表明米尔贝肟吡喹酮片受试品和参比品生物等效，临床可互为替代。

目录

摘要

符号说明

第一章 文献综述

1 米尔贝肟研究进展

1．1 米尔贝肟的发现和发展

1．2 米尔贝肟的理化性质

1．3 米尔贝肟的作用机理

1．4 米尔贝肟的毒理学研究

1．5 米尔贝肟药动学研究

1．6 米尔贝肟对犬内外寄生虫的作用

2 吡喹酮研究进展

2．1 吡喹酮的理化性质

2．2 吡喹酮的作用机理

2．3 吡喹酮的毒理学研究

2．4 吡喹酮的药动学研究

2．5 吡喹酮的临床应用及耐药性

3 研究目的与意义

第二章 犬血浆中米尔贝肟和吡喹酮含量检测方法

一、犬血浆中米尔贝肟含量的测定

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 小结

二、犬血浆中吡喹酮的含量测定

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 小结

第三章 米尔贝肟吡喹酮片在犬体内生物等效性试验

1 材料

1．1 药品

1．2 试剂

1．3 试液的配制

1．4 仪器及设备

2 方法

2．1 实验动物

2．3 血样采集

2．4 血浆样品浓度测定

3．1 药动学参数

3．2 生物等效性评价

4 结果

4．1 实测血药浓度以及动力学参数

4．2 生物等效性参数

5 讨论

5．1 两种米尔贝肟吡喹酮片药动学

5．2 两种米尔贝肟吡喹酮片生物等效性评价

6 小结

全文结论

参考文献

致谢

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