鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活苗安全性、最适抗原含量、免疫持续期及交叉免疫保护研究

摘要

禽致病性大肠杆菌病(Avian Colibacillosis，AC)是由禽致病性大肠杆菌(APEC)引起的禽类传染性疾病，是养禽业重要的细菌病之一。由于抗生素治疗存在菌株抗药性和药物残留的缺陷，有效的疫苗防治禽致病性大肠杆菌病至关重要。
　　本研究分别以鸡致病性大肠杆菌常见血清型O1(E516)、O2(E058)、O78(E522)三个菌株及由本实验室构建的脂多糖缺失E516△lpxL△lpxM、E058△lpxL△lpxM、E522△lpxL△lpxM株为抗原，与Montanide TSA71VG油佐剂制成多价灭活苗。探讨脂多糖缺失灭活疫苗的安全性、最适抗原含量、免疫持续期和疫苗侯选株与流行株的交叉免疫保护。
　　本文主要从以下几方面进行论述：
　　一、鸡大肠杆菌病亲本株和脂多糖缺失多价灭活疫苗的安全性比较
　　研究选取本实验室保存鸡致病性大肠杆菌E516(O1)、E058(O2)、E522(O78)和构建的脂多糖缺失株E516△lpxL△lpxM、E058△lpxL△lpxM、E522△lpxL△lpxM分别制成抗原含量为2.0×109CFU/mL、2.0×1010CFU/mL的多价灭活疫苗，以两倍正常剂量免疫进行安全性试验。结果显示，无论是亲本株还是脂多糖缺失多价灭活疫苗，抗原含量为2.0×109CFU/mL免疫组的安全性优于2.0×1010CFU/mL免疫组;在2.0×109CFU/mL免疫组中，脂多糖缺失多价疫苗的安全性优于亲本株多价灭活疫苗。
　　二、鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗最适免疫抗原含量研究
　　本研究制备抗原含量分别为2.0×108.5CFU/mL、2.0×109CFU/mL和2.0×109.5CFU/mL的O1、O2、O78血清型亲本株及脂多糖缺失株油佐剂多价灭活疫苗。免疫后对其特异性抗体水平、亲本株攻毒保护率及免疫鸡攻毒后内脏组织病理变化进行研究。研究数据显示，抗原含量为2.0×108.5CFU/mL免疫，亲本株疫苗对O1、O2、O78亲本株保护率分别为50.0％、55.6％、55.6％，脂多糖缺失疫苗对O1、O2、O78亲本株保护率分别为50.0％、55.6％、66.7％;抗原含量为2.0×109CFU/mL免疫，亲本株疫苗对O1、O2、O78亲本株保护率分别为80.0％、88.9％、88.9％;脂多糖缺失株疫苗对O1、O2、O78亲本株保护率分别为90.0％、88.9％、100.0％;抗原含量为2.0×109.5CFU/mL免疫，亲本株疫苗对O1、O2、O78亲本株保护率分别为70.0％、77.8％、77.8％;脂多糖缺失株疫苗对O1、O2、O78亲本株保护率分别为80.0％、88.9％、100.0％。因此，本实验室制备的脂多糖缺失多价灭活疫苗不同抗原含量免疫组的保护率均高于相同抗原含量亲本株疫苗组，该疫苗的最适抗原含量2.0×109CFU/mL。
　　三、鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗免疫持续期研究
　　本研究以鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗进行免疫，分别在免疫后30d、60d、90d和120d进行亲本株攻毒，根据特异性抗体水平、亲本株攻毒保护率及鸡内脏组织病理变化进行研究。结果表明，在30d攻毒，疫苗对O1、O2、O78亲本株的保护率分别为88.9％、87.5％、87.5％;在60d攻毒，疫苗对O1、O2、O78亲本株的保护率均为66.7％;在90d攻毒，疫苗对O1、O2、O78亲本株的保护率分别为50.0％、50.0％、66.7％;在120d攻毒，免疫组和攻毒对照组均未出现病死鸡。因此，免疫后30d、60d、90d攻毒，鸡均得到不同程度保护。但由于成年鸡对致病性大肠杆菌的敏感性降低，免疫后120d攻毒免疫组和对照组均未出现病死鸡，所以本研究暂定该疫苗的免疫持续期为3个月。
　　四、鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗交叉免疫保护研究
　　本研究以鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗进行免疫，免疫后检测特异性抗体水平，对O1、O2、O78亲本株和近年流行的菌株O1(Y12，T12)、O2(E172，E899)、O78(Y14，Y48)进行攻毒和免疫鸡内脏组织的病理变化进行研究。研究结果显示，对O1血清型E516、Y12、T12菌株的免疫保护率分别为88.9％、80.0％、87.5％;对O2血清型E058、E172、E899菌株的免疫保护率分别为87.5％、88.9％、80.0％;对O78血清型E522、Y14、Y48菌株的免疫保护率分别为88.9％、80.0％、80.0％。本研究得出此鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗对疫苗候选株和流行株均提供不低于80.0％的保护。

目录

摘要

符号说明

综述一 禽致病性大肠杆菌的研究进展

1 病原学

2 流行病学

3 临床症状和病理变化

4 防治

综述二 禽致病性大肠杆菌疫苗研究进展

1 弱毒疫苗

2 灭活疫苗

3 亚单位疫苗

4 菌影疫苗

第一章 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗的免疫安全性和最适抗原含量研究

1 材料

1．1 疫苗菌株

1．2 检验菌株

1．3 试验动物

1．4 培养基的配方和配制

1．5 主要仪器和设备

1．6 主要试剂

2 方法

2．1 灭活疫苗抗原制备

2．2 疫苗的制备

2．3 成品疫苗疫苗质量检查

2．4 鸡大肠杆菌病亲本株和脂多糖缺失多价灭活疫苗的安全性试验

2．5 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗最适抗原含量免疫保护试验

2．6 间接血凝试验测定血清抗体水平

2．7 病理切片的制备

3 结果

3．1 鸡大肠杆菌病亲本株和脂多糖缺失多价灭活疫苗的安全性比较

3．2 鸡致病性大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗最适抗原含量确定

4 讨论

第二章 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗免疫持续期、疫苗候选株与流行株交叉免疫保护研究

1 材料

1．1 疫苗

1．2 检验菌株

1．3 试验动物

1．4 主要仪器和设备

1．5 主要试剂

2．1 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗免疫持续期试验

2．2 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗交叉保护试验

3 结果

3．1 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗免疫持续期

3．2 鸡大肠杆菌病脂多糖缺失多价灭活疫苗免疫保护

3．3 病理切片

4 讨论

参考文献

全文总结

致谢

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