人胃癌细胞RNA转染树突状细胞诱导特异性抗肿瘤免疫的实验研究

摘要

目的：研究胃癌标本及细胞株RNAs转染树突状细胞（DC）,诱导特异性CTL反应的方法,探讨获取胃癌标本或细胞株RNAs,直接转染DCs进行胃癌生物治疗的可能性,为胃癌的生物治疗提供一种新的思路,并为今后筛选胃癌差异表达基因转染DCs进行胃癌生物治疗奠定基础.方法：对健康志愿者以rhGM-CSF50ug动员后,采集外周血,以淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞（PBMNC）,贴壁细胞（含DC）在细胞因子rhGM-CSF 800u/ml,rhIL-4 500u/ml条件下进行DC的培养扩增;以Trizol试剂盒从胃癌细胞株AGS和胃癌手术标本及癌旁组织分别直接抽提总RNAs用于转染DC,并设立空白对照;四种不同DCs体外刺激淋巴细胞,以MTT法观察不同来源RNAs转染DC所活化的淋巴细胞对AGS及视网膜母细胞瘤SoRb-70的体外杀伤效应.结论：从胃癌及其癌旁组织和细胞株可以抽提到完整的RNAs;在无转染试剂存在的条件下,RNA可以成功转染DC;肿瘤RNA转染DC可以实现完全性抗原的加工递呈,诱导强烈的肿瘤特异性CTL反应.该研究及国内外研究表明肿瘤RNA转染DC治疗恶性肿瘤是一种有前景的治疗方法,而胃癌RNA转染DC治疗胃癌,无须知道明确的抗原成分,可以克服肿瘤标本污染的问题,使完全抗原负载DC治疗恶性肿瘤这一手段可以扩展到胃癌等污染比较严重的肿瘤,具有重要的现实意义.从胃癌手术标本直接提取RNA,直接转染DC,诱导特异性抗肿瘤免疫反应,在国内外尚属首例报道.

目录

文摘

英文文摘

序言

一.肿瘤细胞株培养与不同来源RNA的抽提

二.DC的分离培养、鉴定与RNA转染.

三.活化淋巴细胞同肿瘤的体外杀伤实验

讨论

结论

参考文献

综述

缩略词表

致谢