人BDNF基因在大肠杆菌与COS-7细胞中的表达及功能研究

摘要

目的:克隆人脑源性神经营养因子(Brain-derived neurotrophic factor, BDNF)基因在原核与真核系统中进行重组表达,并进行表达蛋白的功能检测为开发高活性的hBDNF基因重组蛋白和基因治疗载体奠定了基础.方法:从外周血白细胞基因组DNA中经PCR扩增出hBDNF基因片段.将其克隆至pUCm-T载体中,测序鉴定后,再定向插入原核表达载体pBV220和真核表达载体pTracer<'TM>-EV/V5-His.经鉴定后分别导入原核和真核细胞中进行表达.表达产物经SDS-PAGE、RT-PCR、ELISA、Dot-ELISA、MTT和促PC12生长形态学观察等方法进行其抗原和生物学活性等功能的检测.结论:通过基因重组技术获得了BDNF基因,并在大肠杆菌和COS-7细胞中成功表达,表达蛋白具有良好的生物学活性和抗原活性,此实验为生物工程技术研制rhBDNF重组蛋白和基因治疗载体提供了依据.

目录

文摘

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引 言

第一部分人BDNF基因原核表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

第二部分人BDNF基因真核表达载体的构建和在COS-7细胞中的瞬时表达

第三部分hBDNF原核和真核表达蛋白的功能的研究

小 结

参考文献

学习期间发表论文

综 述神经营养素家族

附 录

致 谢