CD80、CD40L单抗协同imDC诱导同种异基因大鼠胰十二指肠移植免疫耐受的实验研究

摘要

目的：观察共刺激分子阻断剂CD80mAb、CD40LmAb在协同imDC诱导同种异体大鼠胰十二指肠移植免疫耐受中的作用。　　方法：经静脉途径给予三种不同剂量(45mg/kg、50mg/kg、55mg/kg)的四氧嘧啶，观察用药后血糖变化及大鼠存活情况；以糖尿病大鼠为受体，采用进腹后立即用输液器连续滴注法(60滴/min)灌注后取供体，显微镜下左肾静脉-门静脉袖套吻合、腹主动脉端侧吻合建立同种异基因大鼠胰十二指肠移植模型；4E5、1B1两株杂交瘤细胞株BABL/C小鼠腹腔注射，抽取腹水，分离纯化后获得CD80mAb、CD40LmAb；分离供体大鼠骨髓来源DC细胞前体，经GM-CSF、IL-4体外刺激后，再加入IL-10共培养，8天后检测细胞表面共刺激分子及MHC表达，鉴定是否为imDC；移植前7天，将2×106imDC经静脉途径注射至受体体内，同时分别给予NS1ml、CD80mAb5mg、CD40LmAb5mg、CD80mAb+CD40LmAb各5mg，连续14天，观察：1、大鼠移植后存活情况；2、移植后14天大鼠移植胰十二指肠大体及镜下病理改变；3、供体的脾T细胞为刺激细胞，受体移植后7、21天脾细胞为效应细胞，混合淋巴细胞共培养(MLR)后，[3H]dTHR释放试验检测宿主抗移植物反应；4、取混合淋巴细胞反应的上清液，检测Th1、Th2细胞因子IL-2、TNF-γ和IL-10、IL-4的浓度；5、移植7、21天后受体血清IgG、IgM水平。　　结论：1、四氧嘧啶50mg/kg经静脉途径能成功诱导大鼠糖尿病模型。2、经过改进方法后获得的供体，在显微外科基础上能够建立稳定的大鼠胰十二指肠移植模型。3、共刺激分子阻断剂CD80mAb、CD40LmAb能够协同imDC诱导受体T细胞对移植物的免疫耐受效应，降低宿主对移植物的急、慢性排斥反应，延长移植物存活时间。

目录

文摘

英文文摘

学位论文独创性声明及学位论文使用授权声明

前 言

第一部分同种异基因大鼠胰十二指肠移植动物模型的建立

一、四氧嘧啶诱导糖尿病大鼠模型的制作

材料和方法

结果

讨论

参考文献

二、同种异基因大鼠胰十二指肠移植动物模型的建立

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第二部分杂交瘤技术B7、CD40L单抗的获得和imDC的体外诱导

一、IL-10体外诱导imDC的定向分化

材料和方法

结果

讨论

参考文献

二、B淋巴细胞杂交瘤技术制备B7单抗和CD40L单抗

材料和方法

结果

讨论

参考文献

第三部分CD80、CD40L单抗协同imDC诱导同种异基因大鼠胰十二指肠移植免疫耐受

材料和方法

结果

讨论

结论

参考文献

综述：同种异基因胰移植免疫耐受诱导策略

一、胰腺移植的历史和现状

二、同种异基因移植免疫耐受概念的提出

三、移植免疫耐受方案的理论基础及诱导策略

参考文献

附图

缩略词表

攻读学位期间公开发表的论文

致 谢