葡萄糖神经酰胺合成酶基因在多药耐药肿瘤细胞株K562/AO2中的表达及其与白血病多药耐药的关系

摘要

目的：观察葡萄糖神经酰胺合酶(glucosylceramide synthase，GCS)基因在人红白血病多药耐药细胞株K562/AO2中的表达及其与肿瘤多药耐药性(multidrugresistance，MDR)的关系，并初步研究GCS基因导致白血病多药耐药的分子病理机制。 方法：运用Alamar Blue<'TM>多功能细胞染色法证实K562/AO2细胞株的多药耐药性；采用半定量RT-PCR技术检测K562/AO2及其亲本K562细胞株的GCS基因、MDR1基因、Bcl-2基因、Bax基因的表达水平及其差异。ELISA法检测耐药和野生细胞株中Bcl-2蛋白的表达情况及培养上清液中Caspase-3的表达水平。应用半定量RT-PCR技术检测K562/AO2细胞经不同剂量(均小于毒性剂量)苯基棕榈酰胺吗啡丙醇(PPMP)作用后GCS基因的表达水平，运用Alamar Blue<'TM>多功能细胞染色法分析K562/AO2细胞经PPMP处理前后多药耐药性的变化。 结果：1．证实了K562/AO2细胞的多药耐药性；2．K562/AO2细胞GCS基因和MDR1基因的表达明显强于K562细胞；3．K562/AO2细胞抑凋亡基因Bcl-2基因的表达强于K562细胞，而促凋亡基因Bax基因的表达则弱于K562细胞；4．K562/AO2细胞株的Bcl-2蛋白表达水平高于K562细胞株(P<0.01)；K562/AO2细胞株的Caspase-3表达水平低于K562细胞株(P<0.05)；5．2.5μmol/L～25μmol/L的PPMP均可抑制K562/AO2细胞GCS基因的表达，25μmol/L时的抑制强度最大；6.K562/AO2细胞经25μmol/L PPMP处理后，多药耐药性被明显逆转。 结论：GCS基因可能在白血病多药耐药中起着重要作用，PPMP通过抑制GCS活性从而对K562/AO2细胞的多药耐药性起到了调控和部分逆转作用。细胞凋亡基因的表达异常可能是GCS导致肿瘤多药耐药的主要分子病理机制之一。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：主要英文缩略词表

声明

前言

第一部分多药耐药肿瘤细胞株K562/AO2中GCS基因表达与白血病多药耐药的关系

第二部分多药耐药肿瘤细胞株K562/AO2中GCS基因高表达与细胞凋亡基因表达异常的关系

第三部分PPMP调控多药耐药肿瘤细胞株K562/AO2中GCS基因的表达及逆转其多药耐药性

实验小结

结论

综述 Bcl-2基因蛋白家族在细胞凋亡调控和肿瘤多药药形成中的作用及其分子机制

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致谢