EZH2、Bmi-1、Survivin及Survivin-3B基因在膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

摘要

目的：应用实时定量PCR方法检测EZH2、Bmi-1、Survivin及Survivin-3B基因在膀胱移行细胞癌中的表达并探讨其临床意义，初步揭示EZH2、Bmi-1、Survivin及异构体Survivin-3B在膀胱移行细胞癌中的作用及临床应用价值。
　　 方法：1.选取2006年3月至2009年6月我院手术切除的膀胱移行细胞癌新鲜标本70例作为实验组，正常膀胱组织15例作为对照。应用实时定量PCR方法检测EZH2和Bmi-1基因的表达情况。实验组中按2004年WHO/ISUP分级标准分组，低度恶性倾向尿路上皮乳头状肿瘤（PUNLMP）5例，低分级乳头状尿路上皮癌23例，高分级乳头状尿路上皮癌42例；按照2002年TNM分期标准分组，表浅性膀胱癌（Tis、Ta、T1）36例，浸润性膀胱癌（T2-T4）34例。2.选取于2009年3月至2009年10月在苏州大学附属第一医院住院的膀胱移行细胞癌患者尿液39例。按照2004年WHO/ISUP分级标准分组，低分级乳头状尿路上皮癌15例，高分级乳头状尿路上皮癌24例；按照2002年TNM分期标准分组，表浅性膀胱癌（Tis、Ta、T1）22例，浸润性膀胱癌（T2-4）17例。取同期健康志愿者尿液13例作为对照组。
　　 结果：
　　 1.EZH2基因在膀胱移行细胞癌组织和尿液中的表达。
　　 （1）EZH2的mRNA表达在正常对照组织中非常低为0.016±237，在膀胱癌组织中的表达量为0.145±0.188，两组比较差异有显著统计学差异，P=0.000。EZH2在不同病理分级及临床分期中的表达量为：PUNLMP组为0.108±0.188，低分级组为0.074±0.098，高分级组为0.189±0.214；表浅性膀胱癌组为0.115±0.197，浸润性膀胱癌组为0.181±0.173。EZH2的表达量在低分级和高分级组以及表浅性和浸润性组相比较，差异均有统计学意义（P<0.05）。（2）EZH2的mRNA在健康志愿者尿液中几乎不表达，表达量为0.002±0.003，膀胱癌组的表达量为0.038±0.060，差异有显著统计学差异，P=0.000。在膀胱癌患者尿液中按不同病理分级及不同临床分期中的表达量分别是：低分级组为0.01±0.016，高分级组为0.056±0.072；表浅性膀胱癌组为0.009±0.014，浸润性膀胱癌组为0.081±0.077。在不同病理分级和临床分期中EZH2的表达量逐步增高，且差异有统计学意义（P<0.05）。同时平行检测11例患者组织和尿液中EZH2的mRNA表达，其组织与尿液中的表达相一致。
　　 2.Bmi-1基因在膀胱移行细胞癌组织和尿液中的表达。
　　 （1）Bmi-1的mRNA在正常对照组织中的表达量为0.175±0.097，在膀胱癌组织中的表达量为：0.689±0.793，两组比较差异有显著统计学差异，P=0.001。Bmi-1在不同病理分级及不同临床分期中的表达量为：PUNLMP组为0.665±0.767，低分级组为0.496±0.455，高分级组为0.799±0.926；表浅性膀胱癌组为0.551±0.499，浸润性膀胱癌组为0.837±1.004。除PUNLMP组之外，Bmi-1的表达量随病理分级和临床分期的增加而增高，但差异无统计学意义。（2）Bmi-1的mRNA在健康志愿者和实验组尿液中的表达量分别为0.030±0.037和0.073±0.079，差异有统计学意义P=0.029。Bmi-1在尿液中按不同病理分级及不同临床分期中的表达量分别是：低分级组为0.044±0.005，高分级组为0.091±0.167，表浅性膀胱癌组为0.041±0.039，浸润性膀胱癌组为0.072±0.076，但差异均无统计学意义。
　　 3.Survivin和Survivin-3B在膀胱移行细胞癌组织中的表达。
　　 （1）Survivin和Survivin-3B的mRNA在正常对照组织中的表达量分别是0.241±0.209和0.006±0.007，在膀胱癌中的表达量分别为1.857±3.239和0.199±0.447，与对照组相比差异均有统计学意义，P值为0.003和0.000。（2）Survivin在不同病理分级及不同临床分期中的表达量为：PUNLMP组为0.267+0.337，低分级组为0.856±1.122，高分级组为2.609±3.938：表浅性膀胱癌组为0.873±1.270，浸润性膀胱癌组为2.899±4.248，其Survivin的表达差异均有统计学意义（P<0.05）。（3）Survivin-3B在不同病理分级及不同临床分期中的表达量为：PUNLMP组为0.019±0.025，低分级组为0.096±0.129，高分级组为0.277±0.556：表浅性膀胱癌组为0.108±0.216，浸润性膀胱癌组为0.295±0.589。Survivin-3B在PUNLMP、低分级和高分级组的表达相比较，差异有统计学意义（P<0.05）；且表浅性和浸润性组相比，差异也有统计学意义（P<0.05）。
　　 结论：
　　 1.EZH2基因在正常人组织和尿液中几乎不表达，但在癌组织和尿脱落细胞中的表达量随着病理分级和临床分期增高而增加，呈明显正相关，且癌组织与尿脱落细胞中EZH2的表达呈平行趋势，提示EZH2表达越高，肿瘤的恶性程度越高，越有侵袭性。因此，EZH2基因转录的失调可能是在肿瘤干细胞水平调控了膀胱肿瘤的发生。
　　 2.Survivin基因在膀胱正常粘膜和膀胱移行细胞癌中均有表达，而Survivin-3B基因在正常组织中极低表达，且Surivin和Surivin-3B基因均随着膀胱肿瘤病理分级的增加和临床分期的增高而表达逐渐增高，因此，Surivin和Survivn-3B基因在膀胱肿瘤的发生和发展中起重要作用，特别是Survivin-3B基因在Surivin基因异构体家族中可能是引起膀胱肿瘤凋亡失调的最重要的靶基因。
　　 3.EZH2、Bmi-1、Survivin和Survivin-3B基因均高表达可能预示TCC患者预后较差。
　　 4.应用实时定量PCR方法联合检测EZH2和异构体Survivin-3B基因在TCC癌组织和尿脱落细胞中的表达量，对早期而无创性诊断膀胱肿瘤、判断膀胱肿瘤的恶性程度及预示术后复发都具有很好的临床应用前景。