慢病毒载体介导的去甲肾上腺素转运体表达下调与抑郁症的相关性研究

摘要

目的：利用慢病毒载体介导的短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA）在大鼠蓝斑核下调去甲肾上腺素转运体（norepinephrine transporter，NET）的表达，探讨其对大鼠抑郁样行为的影响，为抑郁症的基因治疗提供实验依据。
　　方法：（1）构建NET-shRNA重组慢病毒（ShRNA-1146、ShRNA-1222、ShRNA-330、ShRNA-629）及阴性对照（ShRNA-NC），感染PC12细胞后用Q-PCR检测NET mRNA水平，用Western Blot检测NET蛋白水平。
　　（2）Wistar大鼠建立慢性不可预见性温和应激抑郁症模型（chronic unpredictable mild stress，CUMS），持续3周后在大鼠双侧蓝斑核注射NET-shRNA；用强迫游泳实验、糖水偏好实验、旷场实验评价大鼠抑郁样行为；用Western Blot检测大鼠NET水平；用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）检测大鼠去甲肾上腺素（norepinephrine，NE）水平。
　　结果：（1）4个干扰序列均可下调NET的mRNA和蛋白水平，其中ShRNA-1146对NET蛋白的沉默效率最高（P＜0.01）。
　　（2）与抑郁症模型组相比，蓝斑核注射NET-shRNA组大鼠在强迫游泳实验中不动时间减少（P＜0.01），在糖水偏好实验中糖水偏好率增加（P＜0.01），在旷场实验中得分增加（P＜0.01），蓝斑核NET蛋白表达水平下降（P＜0.01），NE水平升高（P＜0.05）。
　　结论：本研究构建的NET-shRNA慢病毒可在体外高效下调NET基因表达，单次注射至抑郁症模型大鼠蓝斑核可使NET基因稳定沉默，逆转大鼠NE能系统功能紊乱，显著改善抑郁样行为，为探索抑郁症的基因治疗提供了实验依据。

目录

声明

前言

本课题研究的特点及创新

第一部分 NET-shRNA慢病毒载体的构建及其基因沉默效应

材料和方法

1 材料

2 实验方法

3 统计学处理

结果

1 NET-shRNA慢病毒载体的构建、测序及滴度测定

2 PC12细胞感染效率检测

3 Q-PCR检测NET mRNA沉默效率

4 Western blot检测NET 蛋白沉默效率

第二部分 靶向蓝斑核的NET-shRNA改善大鼠抑郁样行为

材料和方法

1 材料

2 实验方法

3 统计学处理

结果

1 切片EGFP表达检测

2 慢性不可预见性温和应激对大鼠体重变化的影响

3 蓝斑核注射NET-shRNA 4周对大鼠的行为学影响

4 蓝斑核和杏仁核注射NET-shRNA对大鼠的体重和行为学的影响

5 NET-shRNA对大鼠蓝斑核NET的影响

6 NET-shRNA 对大鼠NE水平的影响

讨论

1 NET-shRNA重组慢病毒的构建

2 NET与抑郁症发病的相关性

3 NET-shRNA对大鼠抑郁样行为的影响

4 蓝斑核NET基因敲除大鼠模型的建立

结论

参考文献

综述:去甲肾上腺素转运体与抑郁症的相关性研究进展

中英文缩略词

攻读学位期间公开发表的论文

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