在泡囊水溶液中磷脂酶A水解卵磷脂反应的研究

摘要

该文建立了一套能够适应于在泡囊水溶液中进行的磷脂酶A2催化水解蛋黄卵磷脂的紫外在线检测方法。该方法具有实验误差小、使用样品少、操作简单等优点。 在卵磷脂/十六烷基三甲基溴化胺(CTAB)/庚烷/水形成的泡囊水溶液中，通过在线检测产物与酚红的作用物在559nm处的吸光度变化，研究了磷脂酶A2(PLA2，EC3.1.1.4)催化水解蛋黄卵磷脂的行为。研究结果表明：(1)磷脂酶A2催化活性受温度、底物浓度、酶浓度、表面活性剂浓度、钙离子浓度等因素的影响，在[E]=1.79umol·L-1，[S]=20mmol·L-1，[CTAB]=400mmol·L-1，[Ca2+]=400mmol·L-1，t=40℃时，磷脂酶A2活性最大;(2)在底物浓度为7.5-25mmol.L-1范围内，酶催化行为符合Michaelis-Menten动力学方程，并得表观米氏常数Km和表观最大反应速率常数Vm。

目录

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摘要

第一章前言

§1.1泡囊水溶液

1.1.1泡囊的结构与尺寸

1.1.2泡囊的形成

1.1.3泡囊的性质

1.1.4泡囊的应用

§1.2底物与酶

1.2.1卵磷脂

1.2.2磷脂酶A2

§1.3磷脂酶A2催化活性测定方法

1.3.1滴定法

1.3.2酸量滴定法

1.3.3放射标记法

1.3.4薄层色谱法

1.3.5单分子层法

1.3.6分光光度法

§1.4磷脂酶A2催化水解卵磷脂研究现状

1.4.1缓冲水溶液

1.4.2有机溶液

1.4.3微乳液

1.4.4泡囊

§1.5酶催化反应动力学

1.5.1 Michaelis-Menten方程

1.5.2 Briggs-Haldane修饰的Michaelis-Menten方程

§1.6选题背景和意义

第二章实验部分

§2.1仪器和药品

2.1.1仪器

2.1.2药品

§2.2游离脂肪酸的检测原理

§2.3磷脂酶A2催化水解卵磷脂反应动力学

2.3.1实验方法的建立

2.3.2实验过程

第三章结果讨论

§3.1磷脂酶A2催化水解卵磷脂影响因素研究

3.1.1温度影响

3.1.2酶浓度影响

3.1.3底物浓度影响

3.1.4钙离子浓度影响

3.1.5庚烷浓度影响

3.1.6表面活性剂浓度影响

§3.2结论

参考文献

附录：实验原始数据

附录1温度影响

附录2酶浓度影响

附录3卵磷脂浓度影响

附录4 CaCl2浓度影响

附录5庚烷浓度影响

附录6表面活性剂的影响

附录7油酸标准曲线

附录8米氏常数和最大速率常数的求法

硕士期间发表论文

致谢