构巢曲霉中钙信号系统中三种新蛋白MidA、CchA及ActnA的可调控启动子替换、荧光标记和功能的研究

摘要

极性生长是真核生物的一个主要特征。钙信号途径参与了细胞极性的建立和维持进程的调节。对于一些真菌的研究表明，CchA、MidA、ActnA 这三种蛋白都参与了钙信号的调节作用。然而，在构巢曲霉内，这三种蛋白的研究尚未见报道。
　　 本文利用先进的荧光蛋白标记技术和基因替代的方法，构建了带有酒精启动子调控、荧光蛋白标记的构巢曲霉同源整合菌株。CchA、MidA 缺失的菌株，菌落生长速度受到一定的抑制。利用钙通道螯合剂处理这两个突变菌株后，菌落生长速度受抑制的现象更加明显；增加钙离子浓度后，菌落生长速度有所加快。这表明CchA、MidA 很可能是钙通道蛋白。由于两者突变后表型类似，我们推测两者可能是两条不同的钙通道，有补充叠加的作用。用CFP 标记MidA的菌株其荧光在孢子和整个菌丝内都有分布，但在孢子的膜上较弱，菌丝内也较弥散；
　　 而用YFP 标记CchA的菌株的荧光集中分布在孢子外侧的膜上，绕孢子呈完整的一圈。这表明这两个蛋白可能都是位于细胞膜上发挥功能的钙通道蛋白。
　　 ActnA 缺失的菌株菌落边缘不整齐，呈扇形，菌丝进行二分叉，这说明ActnA 是与极性生长有关的蛋白。用GFP 标记ActnA的菌株其荧光定位表明该蛋白在菌丝内呈双股平行的丝状分布，这与actin 细胞骨架蛋白的结构有些相似，这表明ActnA 可能是actin的辅肌动蛋白，他们共同参与极性的调节。我们推测ActnA还可能参与钙信号途径，ActnA的突变也影响钙信号，从而破坏actin的结构，使突变菌株极性部分破坏。在构巢曲霉内，对钙信号系统中CchA、MidA、ActnA这三种蛋白的研究尚属首次，这对进一步研究和了解构巢曲霉内钙信号通路的分子机理有十分重要的意义。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 丝状真菌极性生长的研究进展（文献综述）

第二章 MidA 的青色荧光（CFP ）蛋白标记、可调控酒精启动子菌株构建和功能研究

第三章 CchA 的黄色荧光蛋白（YFP ）标记、可调控酒精启动子菌株的构建和功能的研究

第四章 辅肌动蛋白ActnA 的绿色荧光（GFP ）蛋白标记、可调控酒精启动子菌株构建和功能研究

结论

参考文献

致 谢