声明
摘要
第1章 绪论
1.1 磷酸核糖焦磷酸合成酶(PRS)的研究进展
1.1.1 HumanPRPS1突变造成的人类遗传疾病
1.1.2 酿酒酵母中PRS家族蛋白以形成复合体的发挥作用
1.1.3 PRS家族蛋白在细菌中的研究
1.2 在构巢曲霉中研究胞质分裂的意义及研究现状
1.3 构巢曲霉中PRS蛋白参与调节胞质分裂
1.3.1 构巢曲霉中SIN途径反向调节子的筛选
1.3.2 PRS家族蛋白作为SEPH的反向调节子调节胞质分裂
1.4 本课题的研究内容、思路和方法
1.4.1 研究内容
1.4.2 研究思路
1.4.3 研究方法
第2章 构巢曲霉AnPRS蛋白家族的信息学分析和基因敲除实验以及初步的表型研究
2.1 材料与方法
2.1.1 菌种、质粒及培养条件
2.1.2 试剂与仪器
2.1.3 引物设计
2.1.4 融合PCR
2.1.5 构巢曲霉原生质体的制备及转化
2.1.6 重组子的初步筛选
2.1.7 转化子的进一步PCR诊断
2.2 实验结果
2.2.1 转化子的初步表型鉴定
2.2.2 转化子的诊断PCR结果
2.2.3 Anprs1,2,3敲除菌株的细胞学表型
2.3 讨论
第3章 构巢曲霉AnPRS蛋白家族条件菌株的构建、筛选及鉴定
3.1 材料与方法
3.1.1 菌种及培养条件
3.1.2 试剂与仪器
3.1.3 A.nidulans基因组DNA的提取
3.1.4 alcA(p)∷GFP-Anprs1,2,3同源整合菌株的构建
3.1.5 重组子(发生GeneReplacement的转化子)的初步筛选
3.1.6 条件菌株的Western验证
3.1.7 alc∷GFP∷AnPRS1,2,3在酒精启动子调控下的动态定位
3.2 实验结果
3.2.1 重组子的初步表型鉴定
3.2.2 重组子的进一步PCR鉴定
3.2.3 条件菌株的western验证
3.2.4 AnPRS1,2,3三个蛋白的细胞学定位
3.3 讨论
第4章 构巢曲霉AnPRS蛋白家族的细胞学功能研究
4.1 材料与方法
4.1.1 菌种及培养条件
4.1.2 试剂与仪器
4.1.3 显微观察
4.1.4 孢子计数
4.2 实验结果
4.2.1 AnPRS2与AnPRS3对孢子的萌发都是必需的
4.2.2 AnPRS2在菌丝生长中也是必需的,AnPRS3却不是
4.2.3 高表达AnPRS2抑制胞质分裂及无性产孢
4.3 讨论
4.3.1 AnPRS2在构巢曲霉的整个生长阶段都是必需的,AnPRS3只是在孢子萌发阶段是必需的
4.3.2 AnPRS家族对胞质分裂过程的抑制作用
第5章 构巢曲霉AnPRS蛋白家族的转录水平和酶活特性以及蛋白相互作用的分析
5.1 材料与方法
5.1.1 菌种及培养条件
5.1.2 试剂与仪器
5.1.3 实时荧光定量PCR测定Anprs1,2,3在构巢曲霉发育各阶段表达量的差别
5.1.4 PRS酶活力的测定
5.1.5 酵母双杂交实验
5.2 结果
5.2.1 Anprs1,2,3的转录水平在菌丝发育的不同阶段各不相同
5.2.2 AnPRS1,2,3三个蛋白对PRS的酶活贡献各不相同
5.2.3 酵母双杂交实验证实构巢曲霉中AnPRS1,2,3相互之间存在物理相互作用
5.3 讨论
第6章 结论
6.1 PRS蛋白家族在构巢曲霉中所发挥的生物学功能
6.2 ANPRS2在调节构巢曲霉PRPP合成酶活性中扮演核心角色
参考文献
附录
附录A 硕士期间获奖情况
附录B 硕士期间参与课题
附录C 硕士期间发表论文情况
致谢