声明
摘要
第一章 绪论
1.1 嗜热厌氧乙醇杆菌的简介
1.2 嗜热厌氧乙醇杆菌中乙醇代谢途径关键酶的研究
1.3 醛/醇脱氢酶的研究
1.3.1 醛/醇脱氢酶E的简介
1.3.2 嗜热厌氧杆菌中醛/醇脱氢酶的研究进展
1.4 醇脱氢酶
1.4.1 醇脱氢酶的总介
1.4.2 嗜热厌氧乙醇杆菌中醇脱氢酶B的研究进展
1.4.3 醇脱氢酶A的简介
1.4.4 嗜热厌氧乙醇杆菌中醇脱氢酶A的研究进展
1.5 立题背景及本文研究内容
1.5.1 立题背景
1.5.2 本文研究内容
第二章 嗜热厌氧乙醇杆菌醇脱氢酶A克隆、表达及定性
2.1 材料
2.1.1 菌种与质粒
2.1.2 培养基
2.1.3 主要化学试剂及酶
2.1.4 主要仪器设备
2.1.5 DNA引物合成和DNA测序服务
2.2 方法
2.2.1 T.ethanolicus Jw200基因组的提取及检测
2.2.2 分子生物学基本操作
2.2.3 醇脱氢酶A的基因克隆及表达
2.2.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳
2.2.5 蛋白质浓度的测定
2.2.6 NADPH和NADH的标准曲线
2.2.7 醇脱氢酶A酶活测定方法
2.2.8 醇脱氢酶A的酶学性质分析
2.3 结果与分析
2.3.1 目的片段adhA克隆
2.3.2 表达质粒pHsh-adhA的构建
2.3.3 醇脱氢酶A在E.coli DH10B中的表达及纯化
2.3.4 醇脱氢酶A的酶学性质
2.4 讨论
第三章 嗜热厌氧乙醇杆菌乙醇代谢途径中醇脱氢酶A的生理功能研究
3.1 材料
3.1.1 菌种与质粒
3.1.2 培养基和培养基的配制
3.1.3 主要试剂
3.1.4 主要仪器设备
3.2 方法
3.2.1 电转化感受态细胞的制备
3.2.2 T.ethanolicus JW200基因组的提取及检测
3.2.2 基因操作
3.2.2 穿梭质粒pTE-ori-adhA和pTE-ori-adhE-adhA的构建
3.2.3 蛋白质浓度的测定
3.2.4 NADPH和NADH的标准曲线
3.2.5 醇脱氢酶A可逆反应的酶活测定
3.2.6 嗜热厌氧杆菌胞内NADH和NAD+的测定
3.2.7 嗜热菌的超声波转化
3.2.8 乙醇产量的测定
3.3 结果与分析
3.3.1 质粒pTE-ori-adhA和pTE-ori-adhE-adhA的构建
3.3.2 醇脱氢酶A最适条件下的催化特性
3.3.3 醇脱氢酶A生理条件下的催化特性
3.3.4 重组质粒转化嗜热厌氧乙醇杆菌JW200后乙醇产量
3.4 讨论
第四章 全文总结
参考文献
致谢